[发明专利]一种新型冠状病毒（2019-nCOV）检测试剂盒及方法有效
| 申请号： | 202010091765.6 | 申请日： | 2020-02-13 |
| 公开（公告）号： | CN111534633B | 公开（公告）日： | 2022-09-09 |
| 发明（设计）人： | 尹华立;裘惠良 | 申请（专利权）人： | 杭州千基生物科技有限公司;杭州美联医学检验所有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 万尾甜;韩介梅 |
| 地址： | 311200 浙江省杭州市萧山*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 新型 冠状病毒 2019 ncov 检测 试剂盒 方法 | ||
1.一种新型冠状病毒（2019-nCOV）检测试剂盒，其特征在于，包括反应液，阳性对照品，内标，阴性对照品；其中，所述的反应液包括新型冠状病毒检测引物、荧光探针、PCR缓冲体系及酶，所述的阳性对照品包括新型冠状病毒假病毒，所述的内标包括不含靶标基因的外源性片段假病毒，所述的阴性对照品包括生理盐水；该试剂盒用于同时检测新型冠状病毒（2019-nCOV）的：如SEQ ID NO:1所示的ORF1ab基因、如SEQ ID NO:2所示的N基因、和如SEQID NO:3所示的E基因；所述的检测引物及荧光探针为：
ORF1ab F1：GAACCTCATCAGGAGATGC，即SEQ ID NO:5；
ORF1ab R1：ATCATTGAGAAATGTTTACGC，即SEQ ID NO:6；
ORF1ab P：CAAAATTGCCGATAAGTATG，即SEQ ID NO:7，5端标记FAM，3端标记BHQ1；
N F1：TGCTGAGGCTTCTAAGAAGC，即SEQ ID NO:8；
NR1：GATTAGTTCCTGGTCCCCAA，即SEQ ID NO:9；
N P：CATACAATGTAACACAAGCTTTCG，即SEQ ID NO:10，5端标记ROX，3端标记BHQ2；
E F1：TTATACTGAAAAATGGGAATC，即SEQ ID NO:11；
E R1：TAACATGTTCAACACCAGTGTC，即SEQ ID NO:12；
E P：TACACAGTTACTTCACTTCAGAC，即SEQ ID NO:13，5端标记HEX，3端标记BHQ1。
2.如权利要求1所述的一种新型冠状病毒（2019-nCOV）检测试剂盒，其特征在于，所述的内标采用竞争性内标，内标序列为SEQ ID NO:4，检测引物与新型冠状病毒ORF1ab 基因检测引物一致，及荧光探针：
ICP: TTTTGCTAATCATGTTCATACCTC，即SEQ ID NO:14，5端标记CY5，3端标记BHQ3。
3.如权利要求1所述的一种新型冠状病毒（2019-nCOV）检测试剂盒，其特征在于，所述的新型冠状病毒假病毒为外壳蛋白包裹由新型冠状病毒（2019-nCOV）的ORF1ab基因、N基因、和E基因形成的假病毒颗粒；
所述的外壳蛋白为噬菌体MS2成熟酶和噬菌体MS2衣壳蛋白组成；
所述的假病毒颗粒中ORF1ab基因、N基因、和E基因的核苷酸序列即SEQ ID NO:1-3串联。
4.如权利要求1所述的一种新型冠状病毒（2019-nCOV）检测试剂盒，其特征在于，所述的内标，其不含靶标基因的外源性片段假病毒为外壳蛋白包裹内标IC基因形成的假病毒颗粒；
所述的外壳蛋白为噬菌体MS2成熟酶和噬菌体MS2衣壳蛋白组成；
所述的内标IC基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:4。
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