[发明专利]一种新型冠状病毒（2019-nCOV）检测试剂盒及方法

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒(2019‑nCOV)检测试剂盒及方法。所述试剂盒包括反应液，阳性对照品、内标、阴性对照品。所述的反应液包括新型冠状病毒检测引物、荧光探针、PCR缓冲体系及酶，阳性对照品包括新型冠状病毒假病毒，内标包括不含靶标基因的外源性片段假病毒，阴性对照品包括生理盐水。所述试剂盒及方法能快速、灵敏、特性检测出新型冠状病毒2019‑nCoV，可评估样本取样是否合格并能有效监控假阴性的出现，可辅助临床实现早诊断，早治疗。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒(2019-nCOV) 检测试剂盒及方法。

背景技术

冠状病毒为不分节段的单股正链RNA病毒，属于巢病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)正冠状病毒亚科(Orthocoronavirinae)，根据血清型和基因组特点冠状病毒亚科被分为α、β、γ和δ四个属。已知感染人的冠状病毒有6种，包括α属的229E和NL63，β属的OC43和HKU1、中东呼吸综合征相关冠状病毒(MERSr-CoV)和严重急性呼吸综合征相关冠状病毒(SARSr-CoV)。此次从2019年不明原因肺炎患者下呼吸道分离出的冠状病毒为一种属于β属的新型冠状病毒(2019-nCOV)。2019新型冠状病毒是人类分离的第七类冠状病毒，该病毒属于β属，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm。其基因特征与SARS-CoV和MERS-CoV有明显区别。目前研究显示与蝙蝠 SARS样冠状病毒(Bat-SL-CoV ZC45)同源性达85％以上。

目前还未有相关针对新型冠状病毒的检测方法，本发明针对NCBI于2020 年1月10日公开的基因组序列(MN908947)进行序列比对，选取保守区域进行引物探针设计，开发出针对新型冠状病毒(2019-nCOV)ORF1ab基因、N基因、和E基因同时进行实时荧光检测试剂盒及检测方法，并且设计了内标，可评估样本取样是否合格并能有效监控假阴性的出现，可辅助临床实现早诊断，早治疗。

发明内容

本发明的目的是在于针对新型冠状病毒(2019-nCOV)疫情，开发出一种快速检测的试剂盒并提供一种检测方法。

为解决上述的问题，本发明采用以下技术方案：

一种新型冠状病毒(2019-nCOV)检测试剂盒，试剂盒包括反应液，阳性对照品，内标，阴性对照品；其中，所述的反应液包括新型冠状病毒检测引物、荧光探针、PCR缓冲体系及酶，所述的阳性对照品包括新型冠状病毒假病毒，所述的内标包括不含靶标基因的外源性片段假病毒，所述的阴性对照品包括生理盐水；该试剂盒用于同时检测新型冠状病毒(2019-nCOV)的：如SEQ ID NO:1 所示的ORF1ab基因、如SEQ ID NO:2所示的N基因、和如SEQID NO:3所示的E基因。

所述的新型冠状病毒检测引物及荧光探针为：

ORF1ab F1：GAACCTCATCAGGAGATGC，即SEQ ID NO:5；

ORF1ab R1：ATCATTGAGAAATGTTTACGC，即SEQ ID NO:6；

ORF1ab P：CAAAATTGCCGATAAGTATG，即SEQ ID NO:7，5端标记FAM， 3端标记BHQ1；

N F1：TGCTGAGGCTTCTAAGAAGC，即SEQ ID NO:8；

NR1：GATTAGTTCCTGGTCCCCAA，即SEQ ID NO:9；

N P：CATACAATGTAACACAAGCTTTCG，即SEQ ID NO:10，5端标记 ROX，3端标记BHQ2；

E F1：TTATACTGAAAAATGGGAATC，即SEQ ID NO:11；