[发明专利]用于同时检测三种微孢子虫的引物组及其应用

权利要求书

1.用于同时检测三种微孢子虫的引物组，其特征在于，所述引物组包括用于检测肝肠胞虫的第一特异性引物对，用于检测卤虫肠孢子虫的第二特异性引物对以及用于检测河蟹微孢子虫的第三特异性引物对；其中，所述第一特异性引物对是针对核苷酸序列如SEQ IDNO.7所示的虾肝肠胞虫ptp2基因，所述第二特异性引物对是针对核苷酸序列如SEQ IDNO.8所示的卤虫肠孢子虫STPK基因，所述第三特异性引物对是针对核苷酸序列如SEQ IDNO.9所示的河蟹微孢子虫swp7基因；

所述第一特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；

所述第二特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

所述第三特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

2.权利要求1所述的用于同时检测三种微孢子虫的引物组，在制备下述a)或b）中的应用；

a）PCR扩增虾肝肠胞虫ptp2基因、卤虫肠孢子虫STPK基因和河蟹微孢子虫swp7基因片段的试剂或试剂盒；

b）检测虾肝肠胞虫ptp2基因、卤虫肠孢子虫STPK基因和河蟹微孢子虫swp7基因型的试剂或试剂盒。

3.权利要求1所述的引物组，在非诊断目的PCR扩增虾肝肠胞虫ptp2基因、卤虫肠孢子虫STPK基因和河蟹微孢子虫swp7基因片段，或检测虾肝肠胞虫ptp2基因、卤虫肠孢子虫STPK基因和河蟹微孢子虫swp7基因型中的应用；

所述应用中，利用所述第一特异性引物对、第二特异性引物对、第三特异性引物对对待测样品进行三重PCR扩增，分别得到第一PCR扩增产物、第二PCR扩增产物以及第三PCR扩增产物；

将所述第一PCR扩增产物、第二PCR扩增产物、第三PCR扩增产物和虾肝肠胞虫ptp2基因、卤虫肠孢子虫STPK基因和河蟹微孢子虫swp7基因片段标准品进行电泳，若所述第一PCR扩增产物为880bp，判断所述待测样品中含虾肝肠胞虫；

若第二PCR扩增产物为440bp，判断所述待测样品中含卤虫肠孢子虫；

若第三PCR扩增产物为167bp，判断所述待测样品中含河蟹微孢子虫。

4.权利要求3所述的应用，其特征在于，

所述三重PCR扩增体系为2×PCR Mix 10μL，第一特异性引物对1μL，第二特异性引物对1μL，第三特异性引物对1μL，待测样品液2μL，DEPC处理水加至20μL。

5.权利要求3所述的应用，其特征在于，

所述三重PCR的扩增程序如下：预变性94℃，5min；变性94℃，30s；退火55℃，30s；延伸72℃，1min；终延伸72℃，10min；其中，变性、退火和延伸为30个循环。