[发明专利]用于同时检测三种微孢子虫的引物组及其应用

说明书

本发明公开了用于同时检测三种微孢子虫的引物组及其应用，所述引物组包括用于检测肝肠胞虫的第一特异性引物对，用于检测卤虫肠孢子虫的第二特异性引物对以及用于检测河蟹微孢子虫的第三特异性引物对；其中，所述第一特异性引物对是针对虾肝肠胞虫ptp2基因，所述第二特异性引物对是针对卤虫肠孢子虫STPK基因，所述第三引物对是针对河蟹微孢子虫swp7基因。本发明通过多重PCR反应可以快速准确地检测虾蟹中虾肝肠胞虫、卤虫肠孢子虫和河蟹微孢子虫的感染情况，敏感性和特异性较好。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种用于检测微孢子虫的引物组及其应用。

背景技术

虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei，EHP)可感染多种经济虾类，感染后会造成对虾大小不齐，生长减慢或停止，严重降低养殖经济价值。卤虫肠孢子虫(Enterocytospora Artemiae)发现于水产上常用饵料-卤虫中，会感染经济虾类中华小长臂虾，感染了卤虫肠孢子虫的中华小长臂虾会出现肌肉白浊、肝胰腺糜烂的现象。河蟹微孢子虫(Hepatospora eriocheir)是一种严格细胞内寄生的孢子虫，主要寄生于河蟹的肝胰腺，严重威胁河蟹的健康养殖。上述三种微孢子虫给甲壳动物的养殖造成了很大影响。

目前，鉴于虾蟹类微孢子虫感染的复杂性，越来越多病害的发生不止一种微孢子虫的感染，同时通过临床诊断难以区别。目前常规的检测方法是形态学检测，而微孢子虫个体微小，不易于观察，灵敏性和特异性均较低，容易造成误检。

发明内容

为此，本发明提供用于同时检测三种微孢子虫的引物组及其应用，以解决现有技术中检测的微孢子虫过程复杂，灵敏度、特异性低的问题。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

用于同时检测三种微孢子虫的引物组，所述引物组包括用于检测肝肠胞虫的第一特异性引物对，用于检测卤虫肠孢子虫的第二特异性引物对以及用于检测河蟹微孢子虫的第三特异性引物对；其中，所述第一特异性引物对是针对核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的虾肝肠胞虫ptp2基因，所述第二特异性引物对是针对核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的卤虫肠孢子虫STPK基因，所述第三特异性引物对是针对核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的河蟹微孢子虫swp7基因。

优选地，所述第一特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示；

所述第二特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；

所述第三特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

本发明的用于同时检测三种微孢子虫的引物组，在制备下述a)或b)中的应用；

a)PCR扩增虾肝肠胞虫ptp2基因、卤虫肠孢子虫STPK基因和河蟹微孢子虫swp7基因片段的试剂或试剂盒；

b)检测虾肝肠胞虫ptp2基因、卤虫肠孢子虫STPK基因和河蟹微孢子虫swp7基因型的试剂或试剂盒。

优选地，上述引物组，在PCR扩增虾肝肠胞虫ptp2基因、卤虫肠孢子虫STPK基因和河蟹微孢子虫swp7基因片段，或检测虾肝肠胞虫ptp2基因、卤虫肠孢子虫STPK基因和河蟹微孢子虫swp7基因型中的应用；

所述应用中，利用所述第一特异性引物对、第二特异性引物对、第三特异性引物对对待测样品进行三重PCR扩增，分别得到第一PCR扩增产物、第二PCR扩增产物以及第三PCR扩增产物；

将所述第一PCR扩增产物、第二PCR扩增产物、第三PCR扩增产物和虾肝肠胞虫ptp2基因、卤虫肠孢子虫STPK基因和河蟹微孢子虫swp7基因片段标准品进行电泳，若所述第一PCR扩增产物为880bp，判断所述待测样品中含虾肝肠胞虫；