[发明专利]一组miRNA在制备作为用于早期乳腺癌筛查的标志物中的应用

权利要求书

1.一组miRNA在制备作为用于早期乳腺癌筛查的标志物中的应用，其特征在于，miRNA包括如下：

其中在早期乳腺癌发生发展过程中预期会上调的有26种：

hsa-miR-25-5p_R+2,hsa-miR-34a-3p_R+1,hsa-miR-92a-2-5p,hsa-miR-103a-2-5p,hsa-miR-125b-1-3p,hsa-miR-133a-3p_L-1R+1,hsa-miR-155-3p,hsa-miR-191-3p_R-3,hsa-miR-192-3p_R+1,hsa-miR-195-3p_R-2,hsa-miR-199a-5p_R-1,hsa-miR-200c-5p,hsa-miR-202,hsa-miR-215-5p_R+1,hsa-miR-222-p5,hsa-miR-299,hsa-miR-373,hsa-miR-375-5p,hsa-miR-376c,hsa-miR-382-5p,hsa-miR-382-3p_R+1,hsa-miR-409-5p_R-1,hsa-miR-409-3p_L+1,hsa-miR-523-3p_L-1R-2,hsa-miR-526b-5p_R-1,hsa-miR-625-5p_R-1；

其中在早期乳腺癌发生发展过程中预期会下调的有12种：

hsa-let-7a-5p,hsa-let-7b-5p,hsa-miR-30a-5p,hsa-miR-30b-5p,hsa-miR-141-3p_R-1,hsa-miR-148a-3p,hsa-miR-148b-3p_R-1,hsa-miR-200c-3p,hsa-miR-200b-3p,hsa-miR-200a-3p_R+1,hsa-miR-335-5p_R-2,hsa-miR-375-3p。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，miRNA为

其中在正常乳汁中几乎检测不到，在乳腺癌发生发展过程中预期最强上调的11种miRNA：

hsa-miR-125b-1-3p，hsa-miR-155-3p，hsa-miR-191-3p_R-3，hsa-miR-195-3p_R-2，hsa-miR-215-5p_R+1，hsa-miR-222-p5，hsa-miR-382-3p_R+1，hsa-miR-409-5p_R-1，hsa-miR-523-3p_L-1R-2，hsa-miR-526b-5p_R-1，hsa-miR-625-5p_R-1，

在正常乳汁中丰度极高，在乳腺癌发生发展过程中预期最强下调的6种miRNA：hsa-let-7a-5p，hsa-let-7b-5p，hsa-miR-30a-5p，hsa-miR-200c-3p，hsa-miR-200a-3p_R+1，hsa-miR-375-3p。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，通过二代测序或qRT-PCR检测母乳中如权利要求1所述的miRNA。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，通过如下步骤实现：

(1)样本的确定及采集；

(2)母乳中游离RNA(cfRNA)提取即检测；

(4)用二代测序数据或qRT-PCR分析母乳中权利要求1所述的miRNA；

(5)计算乳腺癌风险因子Breast Cancer Burden，BCB，其中BCB1代表预期上调组miRNA的，BCB2代表预期下调组miRNA的。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(5)具体如下：

BCB1＝0.8×(11种预期最强上调miRNA的-ΔCt的均值)+0.2×(其余15种预期上调miRNA的-ΔCt的均值)；

BCB2＝0.8×(6种预期最强下调miRNA的-ΔCt的均值)+0.2×(其余6种预期下调miRNA的-ΔCt的均值)；

其中–ΔCt＝–(Ct目的基因–Ct内参基因)；

BCB1≥-2或者BCB2≤-1，满足其中一条可提出乳腺癌风险早期预警；若同时满足，提示乳腺癌风险强预警。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于步骤(4)中qRT-PCR中采用的特异qRT-PCR正向引物，核苷酸序列如下：