[发明专利]一种制备载药外泌体的方法及载药外泌体

权利要求书

1.一种制备载药外泌体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤（1）：利用无外泌体的培养基培养改造HEK293T细胞并收集细胞；

步骤（2）：将HEK293T细胞置于具有多个直径为200-600 nm通道的基材内培养，然后将基材放入目标质粒DNA的缓冲液中，先进行电穿孔，然后定向电流刺激8-12小时；

步骤（3）：对所得缓冲液进行超速离心，收集沉淀并用缓冲溶液进行重悬得到负载基因药物的外泌体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）包括以下步骤:

构建质粒：利用pcDNA3.1表达载体作为质粒骨架，分别构建3个质粒，pcDNA3.1-STEAP3，pcDNA3.1- SDC4，pcDNA3.1- NadB fragment；

将步骤（a）中的3种质粒按照1：1：1的比例转染到HEK293T细胞中，筛选稳定细胞株，获得改造后的HEK293T细胞株。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述通道的直径为250、300、350、400、450、500或550nm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述定向电流为50-100V，优选为60、70、80、或90V。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（2）中，所述刺激时间为9、10、或11小时。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（3）之后还包括：

步骤（4）：将所得外泌体与靶向多肽通过化学偶联方法反应，得到多肽偶联的外泌体。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（4）包括以下步骤：

步骤c：将所述多肽溶于DMSO溶液，并用Cy5标记后，得到多肽溶液；

步骤d：将所述HEK293T细胞外泌体用DiO染料标记，并溶于Traut’s试剂中，室温反应20-40min，得到巯基化的HEK293T细胞外泌体；

步骤e：将步骤c所得的多肽溶液溶于MBS溶液中，室温反应20-40min，然后与步骤d中所得巯基化的HEK293T细胞外泌体混合，室温反应1-3h，经离心，收集沉淀，再过滤，得到多肽偶联的HEK293T细胞外泌体。

8.一种载药外泌体，其特征在于，所述载药外泌体是通过根据前述第一方面所述的方法制备的。