[发明专利]一种黑水虻抗菌肽的提取方法及其在制备抗烟草病害的肥料中的应用

权利要求书

1.一种抗烟草病害叶面肥，其特征在于，该叶面肥包括以下重量百分比的成分：黑水虻抗菌肽 5-10%、海藻素 10-20%、微量元素 5-10%、磷酸二氢钾 60-70%；

所述微量元素包括B、Mn、Ca和S，所述B、Mn、Ca和S之间的质量比为1：3-5：7-10：12-15；

所述黑水虻抗菌肽通过以下步骤提取得到：

S1、将烟草青枯病菌、烟草野火病菌和烟草角斑病菌分别培养至有效活菌数为（2-5）×10¹⁰个/mL的菌液，合并三种菌液得到诱导菌液；

S2、用上述诱导菌液对4-5龄黑水虻幼虫进行针刺浸泡诱导50-70min，诱导结束后幼虫继续常规饲养40-56h；

S3、将步骤S2的黑水虻幼虫经灭菌、烘干、除杂、粉碎和脱脂后溶于水中制成溶液，然后加入胰蛋白酶，混匀后置于多频超声条件下进行提取，提取结束后经过滤和干燥得到黑水虻抗菌肽。

2.根据权利要求1所述的一种抗烟草病害叶面肥，其特征在于，黑水虻抗菌肽的提取步骤S1所述烟草青枯病菌菌液、烟草野火病菌菌液和烟草角斑病菌菌液以等体积比混合。

3.根据权利要求1所述的一种抗烟草病害叶面肥，其特征在于，黑水虻抗菌肽的提取步骤S3所述脱脂的方法为：按1:15～20的料液比往粉粹后的黑水虻虫粉中加入石油醚，混匀后置于45-55℃下加热回流3次，每次1-2h，经干燥处理后得到脱脂黑水虻虫干粉。

4.根据权利要求1所述的一种抗烟草病害叶面肥，其特征在于，黑水虻抗菌肽的提取步骤S3所述黑水虻与水的料液比为1g：13-17mL，所述胰蛋白酶与溶液的料液比为1g：30-40mL。

5.根据权利要求1所述的一种抗烟草病害叶面肥，其特征在于，黑水虻抗菌肽的提取步骤S3所述胰蛋白酶的酶解温度为37-45℃，pH为7-8，时间为60-100min。

6.根据权利要求1所述的一种抗烟草病害叶面肥，其特征在于，黑水虻抗菌肽的提取步骤S3所述多频超声的超声频率为(10-15)/(20-30)kHz，超声功率为200-250W，脉冲方式为(10-15)s工作/(3-5)s间隙。