[发明专利]一种黑水虻抗菌肽的提取方法及其在制备抗烟草病害的肥料中的应用

说明书

本发明属于肥料制备领域，具体涉及一种黑水虻抗菌肽的提取方法及其在制备抗烟草病害的肥料中的应用，为利用黑水虻抗菌肽制备一种抗烟草病害的肥料，本发明以由烟草青枯病菌菌液、烟草野火病菌菌液和烟草角斑病菌菌液组成的复合菌液作为诱导液，在针刺浸泡处理下诱导黑水虻产生大量抗菌肽，并且通过酶解法制备得到黑水虻抗菌肽，所得黑水虻抗菌肽不仅含量高，而且活性高，对烟草青枯病菌、烟草野火病菌和烟草角斑病菌具有较好的抑制作用；同时，本发明还通过上述黑水虻抗菌肽制备得到一种抗烟草病害叶面肥，该叶面肥对烟草细菌角斑病、烟草青枯病和烟草野火病均表现出很好的防治效果；并且可以改善烟草的农艺性状和品质，提高其经济价值。

技术领域

本发明属于肥料制备领域，具体涉及一种黑水虻抗菌肽的提取方法及其在制备抗烟草病害的肥料中的应用。

背景技术

烟草(Nicotiana tabacum)属茄科(Solanaceae)烟草属(Nicotiana)，为一年生草本植物。我国是当今世界的烟草生产大国，烟叶总产量和总销量都占世界的30％左右。烟草是我国重要的经济植物，烟草税收占到我国财政收入的1/10。烟草是受病害危害最重的作物之一,其发生的病害种类多，症状复杂。常见的烟草病害包括烟草青枯病、烟草野火病和烟草角斑病等，烟草病害的危害不仅造成经济损失，而且由于病害本身产生的毒素及使用农药产生的残留，对人体危害也很大，降低了吸烟的安全性。因此，对烟草病害进行有效的防治，降低病害危害，提升烟草的产量与品质具有积极的作用。

生物活性肽是广泛存在于植物、动物、昆虫中的一类小分子多肽，它具有广泛的抗菌活性，极有可能成为新一代抗菌药。在众多的活性肽中，昆虫抗菌肽以其资源广泛、数量众多独占优势。昆虫抗菌肽是由昆虫细胞特定基因编码产生、由细胞核糖体合成的一类碱性多肽，具有分子小、热稳定性和水溶性好的特点。由于其抗菌谱广，尤其对耐药菌株有明显的杀伤作用，且不破坏生物体的细胞，无免疫原性，而且它的生成和释放是机体炎症反应的组成部分，是宿主防御细菌、真菌等病原微生物入侵的重要屏障，使得昆虫抗菌肽迅速成为生命科学领域研究的热点。

黑水虻(Hermetia illucens L.)是一种全世界广泛分布的重要资源昆虫。其幼虫生活环境与家蝇相似，以动物粪便、腐烂的有机物及植物性垃圾为食。黑水虻具有诸多适于提取抗菌肽的优点，如黑水虻成虫不取食，交配产卵后即死亡，对环境无污染、不传播疾病；化蛹前有迁移特性，可主动移出所饲养环境；各个发育阶段虫体均较大，有利于抗菌肽的大量提取。因此，黑水虻是研究抗菌肽的优良材料。

现有的烟草肥料有多种，主要包括有机肥、无机肥和复合肥，但多数以增效促生长为主，也有少数针对烟草病害防控的专用肥，但大多存在针对病害的种类不明确，应用效果差等缺陷。因此，有必要通过定向诱导的方式定制具备防治特定烟草病害能力的肥料，以提高病害的针对性以及防治的效果。

当前，关于黑水虻抗菌肽的提取及其应用较少，且黑水虻抗菌肽还没有用于制备抗烟草病害肥料的报道。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明的首要目的是提供一种黑水虻抗菌肽的提取方法。

本发明的第二个目的是提供上述提取方法提取得到的黑水虻抗菌肽在制备抗烟草病害的肥料中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种抗烟草病害叶面肥。

为实现上述目的，本发明所采用的技术方案为：

本发明提供一种黑水虻抗菌肽的提取方法，包括以下步骤：

S1、将烟草青枯病菌、烟草野火病菌和烟草角斑病菌分别培养至有效活菌数为2-5×10¹⁰个/mL的菌液，合并三种菌液得到诱导菌液；