[发明专利]一种微生物混菌发酵与原位萃取相结合生产丁酸丁酯的方法

权利要求书

1.一种用微生物混菌发酵与原位萃取相结合生产丁酸丁酯的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将活化的丙酮丁醇梭菌与活化的酪丁酸梭菌接种到发酵培养基中进行发酵；

2）发酵24h后，加入脂肪酶与萃取剂，所述脂肪酶加入量为5 g/L，萃取剂：发酵液=1:2-1；

3）继续发酵，发酵温度35-39 ℃，发酵时间为60-168 h，萃取剂可以原位萃取发酵液中产生的丁酸丁酯。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述丙酮丁醇梭菌和酪丁酸梭菌接种比例为1:1~1:4。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脂肪酶为诺维信435脂肪酶或者固定化南极假丝酵母B脂肪酶。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述萃取剂为生物柴油、油醇、十二烷或者十六烷。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述丙酮丁醇梭菌分类命名为丙酮丁醇梭菌（Clostridium acetobutylicum），菌株号为ATCC 824；所述酪丁酸梭菌分类命名为酪丁酸梭菌（Clostridium tyrobutyricum），菌株号为ATCC 25755。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基配方为：0.5-2.0 g/LNaCl， 0.5-2.0 g/L K₂HPO₄，0.5-2.0 g/L KH₂PO₄，1.0-5.0 g/L 酵母粉，0.2-1.0 g/LMgCl₂·6H₂O，0.1-0.6 g/L NH₄Cl，0.01-0.05 g/L CaCl₂·2H₂O，0.5-2.0 g/L FeCl₂·4H₂O，0.1-0.5 g/L KCl，葡萄糖30-90 g/L，溶剂为水，调节pH至6.0-6.5。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述活化的丙酮丁醇梭菌的接种量为发酵培养基体积的1-10%；所述活化的酪丁酸梭菌的接种量为发酵培养基体积的1-10%。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵过程pH调控在4.0-8.0。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，当丙酮丁醇梭菌和酪丁酸梭菌接种比例为1:1时，在丙酮丁醇梭菌生长一天后再接种酪丁酸梭菌。

10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，若丙酮丁醇梭菌和酪丁酸梭菌同时接种时，丙酮丁醇梭菌和酪丁酸梭菌的最优接种比例为1:4。