[发明专利]绵羊PRL基因插入/缺失多态性的检测引物对、试剂盒、方法和应用有效
| 申请号： | 202010098388.9 | 申请日： | 2020-02-18 |
| 公开（公告）号： | CN111088373B | 公开（公告）日： | 2023-04-28 |
| 发明（设计）人： | 张清峰;蓝康澍;曹如;潘传英;林春建;王权锋;李若亮;兰天鑫;蓝贤勇 | 申请（专利权）人： | 天津奥群牧业有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人： | 李晶 |
| 地址： | 301600 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 绵羊 prl 基因 插入 缺失 多态性 检测 引物 试剂盒 方法 应用 | ||
1.一种绵羊PRL基因插入/缺失多态性检测用引物对在绵羊产羔数分子标记辅助选择育种方面中的应用，其特征在于，
所述引物对为：
上游引物：5'-GGGAAGGGAAGAGAAACAGAGG-3'；
下游引物：5'-GCTTGTAGGGTGGAACACTGA-3'；
所述插入/缺失的序列为：GAGTCTTTATGAAGAGAAACACC；
所述绵羊为澳洲白绵羊；
所述绵羊产羔数为第一胎产羔数和平均产羔数。
2.一种利用引物对的绵羊PRL基因插入/缺失多态性的检测方法在绵羊产羔数分子标记辅助选择育种方面中的应用，其特征在于，所述检测方法步骤如下：
以待测绵羊基因组DNA为模板，以引物对为扩增引物，利用PCR扩增包含绵羊PRL基因内含子区插入/缺失多态性位点的片段，对扩增产物进行电泳，根据电泳结果鉴定所述插入/缺失多态性位点的基因型；
所述引物对为：
上游引物：5'-GGGAAGGGAAGAGAAACAGAGG-3'；
下游引物：5'-GCTTGTAGGGTGGAACACTGA-3'；
所述插入/缺失的序列为：GAGTCTTTATGAAGAGAAACACC；
所述绵羊为澳洲白绵羊；
所述绵羊产羔数为第一胎产羔数和平均产羔数。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增采用的反应程序为：95℃预变性5min；94℃变性30s，68℃退火30s，72℃延伸12～24s，18个循环，每循环后退火温度减1℃；50℃退火30s，72℃延伸12～24s，25～30个循环；72℃延伸10min。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述电泳时采用质量浓度为3.0～3.5％的琼脂糖凝胶。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，根据电泳结果，所述插入/缺失多态性位点的插入/插入基因型II表现为110bp一条带纹，插入/缺失基因型ID表现为110bp和87bp两条带纹，缺失/缺失基因型DD表现为87bp一条带纹。
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