[发明专利]绵羊PRL基因插入/缺失多态性的检测引物对、试剂盒、方法和应用

说明书

本发明涉及一种绵羊PRL基因插入/缺失多态性检测用引物对，所述引物对能够用于PCR扩增包含绵羊PRL基因内含子区插入/缺失多态性位点的片段。本发明能够简单、快速、低成本、精确地检测所述插入/缺失多态性位点的基因型，本发明检测的插入/缺失多态性位点能够作为绵羊产羔数的分子标记位点，从而加快建立产羔数性状优良的绵羊种群，提高良种选育速度。

技术领域

本发明属于生物技术与家畜育种技术领域，尤其是一种绵羊PRL基因插入/缺失多态性的检测引物对、试剂盒、方法和应用。

背景技术

绵羊以其产肉、产奶和产绒性能深受消费者的喜爱，随着人们生活水平的提高，社会对羊肉、羊奶、羊绒等产品的需求越来越高。为了实现高产、优质和高效的绵羊育种目标，人们对绵羊的研究已在分子水平上，以DNA的多态性为标记对绵羊进行基因结构和功能的遗传分析和研究，通过筛查与绵羊产羔数性状密切相关的DNA标记位点并进行检测，并根据其基因多态性与产羔数性状的关联，从而可以加快建立优良产羔数性状绵羊种群，这类标记具有存在较为普遍、遗传稳定、准确度高等优点，因而被广泛应用于各个领域。

分子标记辅助选择(MAS)作为分子遗传标记的常用方法，通过对目标基因所连锁的分子标记的基因型分析从而进行育种，使用这种方法可以大幅度地缩短育种年限，针对某一性状专一选择，从而能够有效地提高育种效率。

近年来，随着测序技术的不断升级与测序成本的降低，插入/缺失(indel)突变作为一种重要的分子遗传标记而逐渐受到人们的重视。插入和缺失(InDels)构成自然突变库的重要组成部分，InDels是由于聚合酶滑移、转座子、不均等交叉等导致的在整个基因组中大量分布的结构，有时可能导致生物体功能的获得或丧失。InDels最常见的类别包括单碱基对插入和缺失，单体碱基对扩展和多碱基对扩展，然而在基因组中包含随机序列和转座子插入的InDel相对较少。由于可以简单的使用凝胶对InDels进行基因分型鉴定，使InDels更具价值。在以前的一些研究中，还发现InDels比微卫星标记更具多态性。如今，InDels已在多种应用中使用，包括种群遗传学、分类学诊断标记、遗传图谱构建和不同农作物中的关联图谱，在动物繁殖性状的选育方面的indel标记的研究和应用较少。在羊上已有的部分关于indels的报道显示：在生长方面，有报道在陕北白绒山羊KDM6A基因内含子区域存在一个16bp的indel可以显著的影响山羊的体高，胸深，体长等生长性状(Wang.et al.,2018)；在繁殖方面，有报道山羊CTNNB1存在一26bp的indel与山羊第一胎产羔数极显著相关(Zhang.et al.,2018)；还有chen等对山羊SPEF2三个indel位点进行了关联分析，发现SPEF12对山羊的产羔数有显著影响(chen et al.,2018)。这些研究都表明InDels对动物分子育种具有重要的意义和参考价值。

催乳素(prolactin,PRL)基因属于生长激素/催乳素家族的一员。名称最早来自它能刺激鸽子嗉囊的上皮细胞增生生成嗉乳。Cooke等研究发现典型的催乳素由5个外显子和4个内含子组成。催乳素存在于所有脊椎动物体内，由垂体前叶的乳营养细胞分泌，通过近旁分泌、旁分泌和自分泌等形式发挥作用，进而对动物的各种生理活动起经典的内分泌调节器的作用。绵羊休情季节维持高度PRL，发情季节PRL降至低浓度。绵羊哺乳期也维持高浓度的PRL。Wu等(1995)表明，在人子宫-胎盘体中只有蜕膜层细胞表达PRLmRNA,催乳素基因表达的水平和个体蜕膜细胞的催乳素产量之间有密切联系，依次与持续贯穿人完整妊娠期的蜕膜化作用过程直接相关。催乳素作用广泛，除了能够促进乳腺发育和乳的生成、刺激黄体分泌孕酮等作用外，还能广泛地影响免疫系统的发育与调节水盐平衡。ZHAO Xiu-hua等(2007)研究表明不能合成催乳素的小鼠由于排卵、受精、着床前的发育和着床缺陷导致无生殖能力。因此，研究PRL基因的突变对于快速培育产羊羔数性状优良的绵羊种群、达到更高的经济效应有重要意义。

通过检索，尚未发现与本专利申请相关的公开专利文献。

发明内容