[发明专利]一种基于玻纤滤纸的病毒核酸提取方法

说明书

本发明公开了一种基于玻纤滤纸的病毒核酸提取方法，包括以下几个步骤：步骤一，在生物样本中加入蛋白酶K，快速混匀，得混合溶液；步骤二，加入结合缓冲液和Carrier RNA，上下颠倒充分混匀；步骤三，将混合液滴加在玻纤滤纸上，玻纤滤纸以双圈滤纸为支撑物固定，过滤的废液用吸水纸吸去；步骤四，用洗涤缓冲液清洗，再用吸水纸吸去废液；步骤五，在玻纤滤纸上滴加洗脱缓冲液，收集洗脱液即获得所需核酸。本方法将玻纤滤纸引入核酸抽提方法中，可以用于生物样本中核酸的富集和提取。该方法简化了核酸抽提的步骤和所需仪器设备，节省了操作时间，降低了提取成本，同时保证了高效的核酸回收率。

技术领域

本发明属于用于医学检测的样本核酸提取技术领域，具体涉及一种从生物样本中快速提取核酸的方法，更具体涉及一种基于玻纤滤纸的病毒核酸提取方法。

背景技术

血浆、血清和组织液等体液可被用于多种血源性传染病的主要检测分析样本。常见的血源性传染病有疟疾、慢性乙型病毒性肝炎、获得性免疫缺陷综合征等，这些疾病由寄生于人体血液和淋巴中的病原体所引起，主要透过血液、伤口的接触与交换将疾病传递至另一个体身上。因此通过提取并检测血液中病原体核酸含量，可帮助判定是否感染疾病、感染进程及预后状态等情况。

玻璃纤维滤纸呈化学惰性，不含粘合剂，采用100％硼硅酸玻璃纤维制造而成。具有毛细纤维结构，能吸附比同等纤维素滤纸更多的水分，具有流速快，耐高温，纳污能力强的特点，并可以过滤细小的颗粒。作为玻璃钢制品的重要组成部分，玻璃纤维的应用非常广泛，其中滤纸的应用与日常生活非常紧密。在一定的离子环境下，核酸可被选择性地吸附到硅土、硅胶或玻璃表面而与其他生物分子分离。

传统的核酸提取方法主要有：酚抽提法、碱裂解法、CTAB抽提法和EtBr-CsCl梯度离心法。这些传统提取方法可从不同组织样本中分离出核酸，但这些技术中包含沉淀和离心等操作步骤，其所需的生物样本量较大，且提取的步骤较为繁杂、费时费力，得率也不高。以固相吸附物载体为基础的新型核酸提取方法如旋转离心柱提取法、阴离子交换法、纳米磁珠提取法和玻璃粉吸附法等。其中离心柱提取法和纳米磁珠提取法得到了广泛运用，但不足的是离心柱法提取核酸需要反复离心，且需要离心机这样的仪器设备满足需求，而纳米磁珠提取法需要则外加磁场，且所需样本通常在200uL及以上，体积相对较大，且富集和洗脱过程较为繁琐。

发明内容

针对现有问题的不足，本发明的目的是提供一种基于玻纤滤纸的病毒核酸提取方法，能够实现现场快速提取和纯化核酸，操作方便。

本发明解决其技术问题采用的技术方案是：

为实现上述目的，本发明提出了一种基于玻纤滤纸的核酸提取方法，包括以下几个步骤：

步骤一，在待提取核酸的生物样本中加入蛋白酶K，快速混匀，得混合溶液，蛋白酶K帮助裂解病毒以释放核酸；

步骤二，在步骤一所得混合溶液中加入结合缓冲液和Carrier RNA，结合缓冲液帮助核酸吸附在玻纤膜上，核糖核酸载体帮助富集核酸；

步骤三，将步骤二所得混合液滴加在玻纤滤纸上，玻纤滤纸以双圈滤纸为支撑物固定，过滤的废液用吸水纸吸去，此时所需核酸吸附在玻纤滤纸上；

步骤四，用洗涤缓冲液清洗1～2次，用吸水纸吸去废液，目的是去除可能严重影响下游应用的任何残留污染物；

步骤五，在玻纤滤纸上滴加洗脱缓冲液，收集过滤的洗脱液即获得所需核酸溶液。

作为优选，所述步骤一中，蛋白酶K浓度为20-200ug/mL。

作为优选，所述步骤二中，Carrier RNA浓度为1-8ug/mL，更优选的，所述CarrierRNA浓度为3-6ug/mL。