[发明专利]一种流感、HIV嵌合蛋白及嵌合病毒疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种流感、艾滋嵌合病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：利用活的流感病毒来进一步感染可以稳定表达SEQ ID NO：1所示的融合蛋白gp120-HA2的哺乳动物细胞系，最终获得能够在病毒囊膜上展示gp120-HA2融合蛋白的流感、艾滋HIV嵌合病毒，作为灭活疫苗，以同时抵抗流感病毒和艾滋病毒对机体的侵染，方法包括以下三个步骤：

S1:使用携带外源基因质粒PLV-gp120-HA2慢病毒感染哺乳动物细胞系，在一定浓度的嘌呤霉素的筛选下，获得可以在细胞质膜上稳定地表达流感、艾滋HIV囊膜融合蛋白gp120-HA2的细胞株；在细胞质膜上被稳定地表达的gp120-HA2融合蛋白是由流感病毒血凝素蛋白-HA蛋白的HA2区结构域与HIV病毒囊膜蛋白gp120相融合而得到的，血凝素蛋白的HA2区结构域使其自发地嵌入流感病毒的囊膜上，并形成三聚体结构，从而以三聚体的形式正确展示HIV的gp120蛋白；

S2:将活的流感病毒接种在此基因工程改造的稳转细胞株，并加入TPCK-胰酶培养48至72 h，利用流感病毒从细胞质膜出芽，最终使得重组的囊膜融合蛋白gp120-HA2展示在该流感病毒的囊膜上，从而获得高滴度的流感HIV嵌合病毒；

S3:超速离心获得流感HIV嵌合病毒，并灭活该嵌合病毒，用作能够同时抵抗流感病毒以及艾滋病毒的双价疫苗。

2.根据权利要求1所述的一种流感、艾滋嵌合病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：步骤S2所述的流感HIV嵌合病毒是由流感病毒和病毒囊膜上定向表达的gp120-HA2嵌合膜蛋白构成的。

3.根据权利要求1所述的一种流感、艾滋嵌合病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：活的流感病毒来源于鸡胚或者哺乳动物细胞的体外培养，且流感病毒为人流感病毒。

4.根据权利要求1所述的一种流感、艾滋嵌合病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：步骤S1所述的被慢病毒感染的哺乳动物细胞系包括VERO细胞、MDCK细胞、CHO细胞以及HEK293T细胞系中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的一种流感、艾滋嵌合病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：步骤S3中，所述的灭活是向该嵌合病毒加入甲醛，进行灭活；或者向嵌合病毒加入表面活化剂，使得病毒被裂解灭活。

6.根据权利要求5所述的一种流感、艾滋嵌合病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于：所述的裂解灭活为使用包括去氧胆酸钠、Triton-X100或吐温80在内的化学表面活化剂，对嵌合病毒进行裂解作用。