[发明专利]一种流感、HIV嵌合蛋白及嵌合病毒疫苗的制备方法

说明书

本发明公开了一种流感、HIV嵌合蛋白及流感、艾滋嵌合病毒灭活疫苗的制备方法，具体步骤包括以下：利用活的流感病毒来进一步感染可以稳定表达融合蛋白(gp120‑HA2)的哺乳动物细胞系，最终获得能够在病毒囊膜上定向展示gp120‑HA2融合蛋白的流感、艾滋(HIV)嵌合病毒，用作灭活疫苗，以同时抵抗流感病毒和艾滋病毒对机体的侵染。

技术领域

本发明涉及一种流感、HIV嵌合病毒疫苗的制备方法以及(gp120-HA2)融合蛋白的设计，属于一种新型的嵌合疫苗，属于疫苗生产技术领域。

背景技术

流感病毒的传播和不断变异严重威胁到国家的公共卫生安全。尤其是最近几年，禽流感病毒的不断变异以及在人群中的爆发，导致了极高的死亡率，禽流感病毒可能会在未来进一步地获得人与人之间传播与扩散的能力，这将成为了未来人类社会的最大可能的威胁。目前我国大多数流感疫苗生产厂家还是以鸡胚为主要的繁殖病毒的基质。该工艺对健康、无菌的鸡胚存在很大的依赖性，鸡胚的供应量可能无法满足大规模疫情爆发时所需要的生产条件，进而可能导致流感病毒疫苗的产量不足，无法保障能快速地为全社会提供充足的疫苗供给。因此，开发出以哺乳动物细胞发酵为基础的疫苗生产体系，能够极大地弥补鸡胚供应不足的限制，有效地提高了流感疫苗生产的产量。

为了能够利用细胞发酵技术以工业化生产优质的流感疫苗，研究人员研发并采用优化的微载体细胞悬浮培养、无血清培养、优化细胞培养密度或工程化改造细胞系等方法，以进一步地提高基于细胞培养的流感疫苗产量。流感病毒血凝素HA蛋白，由球状区HA1结构域和茎部区HA2结构域组成，HA1约有320个氨基酸,由一些不平行的折叠构成球状头部；HA2约有240个氨基酸,和部分HA1区一同组成茎部三聚体区域,含有多股螺旋结构,其C端含有细胞膜锚定序列以及膜融合多肽等功能单位。

人类免疫缺陷病毒(HIV)目前仍在全球大规模的传播，并每年导致大量感染者的死亡与发病，艾滋病人已经成为了各个国家沉重的负担，每年投入在艾滋病预防、治疗的经费，仍然不断增加。然而，艾滋病的治疗甚至艾滋病疫苗仍然还是处于研发阶段。虽然疫苗被认为是预防病毒性传染病的最有效的武器。不幸的是，HIV属于逆转录病毒，极容易产生突变，能够发生快速的抗原转变并形成不同血清型的各种复杂毒株。如何生产出针对各种血清型的HIV毒株都具有交叉保护效果的HIV疫苗，已经成为了疫苗研发领域中的最严峻的挑战。传统的制备化学灭活以及减毒疫苗的生产方法已经被证明无法生产出具备广谱保护效力的HIV-1疫苗。使用新的疫苗抗原展示平台，开发出有效的HIV疫苗，是未来重要的研究方向之一。基于以上背景，生产出能够同时抵抗流感病毒与艾滋病毒的新型疫苗载体具有良好的市场发展潜力。

发明内容

本发明的主要目的，在于制备能够在流感病毒囊膜上定向展示gp120-HA2融合蛋白的流感、艾滋(HIV)嵌合病毒，用作灭活疫苗，以同时抵抗流感病毒和艾滋病毒对机体的侵染。

本发明的另一目的，在于提供gp120-HA2融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明还提供所述的gp120-HA2融合蛋白在制备流感、艾滋嵌合病毒灭活疫苗中的用途。

本发明所述的流感、HIV嵌合蛋白(gp120-HA2融合蛋白)是由流感病毒血凝素蛋白(HA蛋白)的HA2区结构域与HIV病毒囊膜蛋白gp120相融合而得到的。血凝素蛋白的HA2区结构域可以保证融合蛋白(gp120-HA2)自发地嵌入到流感病毒的囊膜上，并形成三聚体结构，从而以三聚体的形式正确展示HIV的gp120蛋白。

该融合蛋白(gp120-HA2)属于一型跨膜蛋白，从N端到C端分别由流感病毒HA蛋白的信号肽、HIV的囊膜蛋白gp120、流感病毒HA蛋白的HA2区构成。此外HA2结构域还包含了流感HA蛋白的跨膜区(TMD)以及和胞质区(CPD)。gp120-HA2的具体结构如实施例中的图1的样本。此融合蛋白的序列如SEQ ID NO：1所示。