[发明专利]一种提高烟草镉敏感性的方法

权利要求书

1.一种提高烟草镉敏感性的方法，其特征在于，利用叶盘浸染法，将MhNRAMP6在烟草内过量表达，MhNRAMP6基因的核苷酸序列如SEQ No.1所示。

2.根据权利要求1所示的方法，其特征在于，所述方法的具体步骤如下：

(1)利用带有酶切位点的特异性引物进行PCR扩增pMD18-T-MhNRAMP6，产物与pROKII重组并构建了含MhNRAMP6基因的植物过表达载体pROKII-MhNRAMP6，转化农杆菌GV3101，获得带目的片段的表达载体的阳性菌株；特异性引物及酶切位点为：

F:CGGGAATGGCTGTGGCCAGTACGG(BamHI)；

R：GGGGTAGGTCTACCGAAAATATCGA(KpnI)；

(2)选取1cm×1cm幼嫩叶片在分化培养基中预培养2d，其中，分化培养基为MS+0.5mg·L^-16-BA+0.05mg·L^-1NAA；

(3)将叶片放入含有农杆菌(OD600为0.8)的1/2MS悬浮液中浸泡5min取出，滤纸吸干多余菌液；

(4)在28℃黑暗条件条件下，将浸染后的叶片在分化培养基中培养2d；

(5)随后在筛选继代培养基和筛选生根培养基中进行培养，15d更换一次培养基，获得生长状态良好的烟草；其中，继代培养基为MS+0.5mg·L^-16-BA+0.05mg·L^-1NAA+50mg·L^-1Kana+500mg·L^-1Cef，筛选生根培养基为MS+0.2mg·L^-1IBA+50mg·L^-1Kana+200mg·L^-1Cef；

(6)将步骤(5)获得的烟草通过荧光定量PCR方法，获得转基因烟草植株。