[发明专利]一种可以评估肝脏纤维化程度的肝星状细胞靶向磁共振分子显像剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种可以评估肝脏纤维化程度的肝星状细胞靶向磁共振分子显像剂及其制备方法，属于药物和生物成像技术领域。本发明通过耦联视黄醇分子和AKT抑制剂，可以特异性靶向肝星状细胞，检测肝脏纤维化的程度及发展过程。其特点在于欧联有视黄醇具有磁共振显像功能，同时欧联的抑制AKT具有治疗肝纤维化的功能，达到诊疗一体化的目的。其特点在于显像灵敏度高。

技术领域

本发明属于药物和生物成像技术领域，特别是涉及一种可以评估肝脏纤维化程度的肝星状细胞靶向磁共振分子显像剂及其制备方法。

背景技术

肝纤维化和肝硬化是常见的慢性进行性肝脏疾病，是肝脏对慢性损伤进行的一种修复反应。受损的肝细胞和活化的枯否氏细胞分泌的各种细胞因子会导致肝星状细胞(HSC)活化成为肌纤维母细胞，活化的星状细胞合成并分泌大量的以胶原为主的细胞外基质沉积在肝脏，导致肝纤维化的产生，肝纤维化可进一步发展成为肝硬化。

肝纤维化是慢性损伤导致肝脏细胞外基质(ECM)过度沉积，肝星状细胞(HSC)是肝纤维化的主要效应细胞。在各种因素作用下，肝细胞、枯否氏细胞(Kupffer)、内皮细胞和星状细胞自身可产生多种细胞因子与活化产物等，这些因子可以通过各种信号通路调节HSC的功能，PI3K/Akt是其中重要的一条通路。

肝纤维化无创伤性的评估方法有：1)纤维化血清标记物。器官特异性差，易受炎症和机体代谢的干扰，标准化困难，组合指标更多反映炎症，对纤维化分期较困难；2)生化指标。需多项组合(如Fibrotest)。由于肝脏极强的储备功能，只在严重肝纤维化时改变明显，并且生化指标影响因素多，解释困难，不同病因、不同时期的肝纤维化评估的准确性不同；3)常规影像。目前常规B超、CT、MRI难于反映肝纤维化早期改变，评估多限于肝硬化及并发症。

目前诊断和评估肝纤维化的方法都未能较好反映慢性肝损伤修复过程中活化细胞表型和数量变化等分子病理改变，在可靠性、敏感性、可操作性等方面存在不一致性，尚难达到临床对肝纤维化早期诊断和治疗效果实时动态评估的要求。不能对肝纤维化做出正确评估一直以来是制约基础研究走向临床的“瓶颈”，也是不能开发抗纤维化药物与临床试验的重要原因。

目前在临床上，肝活检仍是评估肝纤维化的唯一“金标准”。然而，肝活检是有创的，可引起相应的并发症，因此不能被患者普遍接受，这造成了很大一部分慢性肝病患者在诊断和治疗上的延误；同时，在无明显症状的患者中，很难重复进行肝活检，这就无法准确地随访慢性肝病患者病情的变化；此外，样本取样误差和病理观察的不一致性都影响了肝活检的准确性。因此，需要一种精确的无创伤性的方法来诊断和评估肝纤维化。

发明内容

本发明的目的是提供一种可以准确评估肝纤维化程度的磁共振分子显像剂，通过耦联视黄醇分子及AKT抑制剂，可以特异性靶向肝星状细胞，检测肝脏纤维化的程度及发展过程，其特点在于同时具有抑制AKT，治疗肝纤维化的功能，达到诊疗一体化的目的。

本发明是通过以下技术方案实现的。

1)磷化铁纳米颗粒制备：将0.01-10g乙酰丙酮铁分散于2-200mL油胺中，加入0.1-200mL三辛基膦；所得混合液升温至120℃，反应30分钟，随后继续升温到300-350℃，反应0.5-10小时；反应停止后待反应液自然冷却至室温，再按体积比1:3-5加入乙醇、异丙醇或丙酮进行离心处理，所得沉淀为油溶性的磷化铁纳米颗粒；

2)视黄醇活化：取0.56gN,N-羰基二咪唑(CDI)溶于20ml二甲基亚砜(DMSO)中，完全溶解后加入1g视黄醇，在避光条件下30℃恒温搅拌24小时，得到活化的视黄醇。

3)磷化铁纳米颗粒与视黄醇连接：将0.1-500mg油溶性的磷化铁纳米颗粒溶解于1-50mL氯仿中；将0.5-500mg的视黄醇溶于1-50mL氯仿中；然后将两种溶液充分混合，于通风橱中静置以使液体挥发消失，再使用真空泵抽至完全除去溶剂，加水重新溶解，即得到表面配体为视黄醇的磷化铁纳米颗粒造影剂溶液。