[发明专利]一种人脐带血间充质干细胞的培养方法

说明书

本发明属于细胞生物学领域，具体涉及一种人脐带血间充质干细胞的培养方法。包括以下步骤：将脐带血单个核细胞用第一培养基培养至细胞生长状态稳定，后续改用第二培养基进行培养，所述第一培养基主要由基础培养基、胎牛血清、抗生素和间充质干细胞生长添加物组成，其中胎牛血清体积占比为8‑12％，间充质干细胞生长添加物体积占比为0.1‑0.2％；所述第二培养基主要由基础培养基、胎牛血清、抗生素组成，其中胎牛血清体积占比为8‑12％；所述基础培养基为DMEM/F12培养基。本发明的人脐带血间充质干细胞的培养方法，步骤简单、经济成本较低、培养成功率高，适于获取大量的间充质干细胞以满足相关疾病治疗时的使用量较大的需求。

技术领域

本发明属于细胞生物学领域，具体涉及一种人脐带血间充质干细胞的培养方法。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)具有自我更新、多向分化的潜能，目前已成为基因治疗领域中极具实用价值的细胞来源。MSCs最初由骨髓中分离获得并且应用得最为广泛，其他组织器官也能分离到MSCs。目前，不同组织来源的MSCs已经被应用于临床疾病的治疗，比如脐带血、月经血、脂肪组织等。其中，人脐带血是一个良好的细胞来源，其不是来自母体的血液，而是属于胎儿自身的血液，与母体血液互不混淆。但是，脐带血在分娩时通常被当作“垃圾”弃掉，其有用价值急需开发。

脐带血具有来源丰富、采集简便、免疫原性低、增殖能力强、无伦理学限制等优点，脐带血中的间充质干细胞更为原始，扩增能力较骨髓间充质干细胞更强，故脐带血间充质干细胞的作用越来越突出，可作为相关疾病的细胞移植治疗的材料。在世界范围内，脐带血可以用于80多种疾病的治疗，包括白血病、再生障碍性贫血、系统性红斑狼疮、骨髓增生异常综合征、恶性淋巴瘤、恶性肿瘤、重症免疫缺陷病及代谢性疾病等。早产儿的间充质干细胞的含量比普通胎儿的更高些，若能实现对早产儿的脐带血进行分离、培养和保存，可以为以细胞水平治疗早产儿相关疾病提供优良的材料。

但是，人脐带血间充质干细胞(Human umbilical cord blood-mesenchymal stemcells，hUCB-MSCs)在单个核细胞中的比例仅为0.001-0.01％，从脐带血中分离间充质干细胞的成功率相对较低。截止目前，关于人脐带血间充质干细胞的体外分离培养方法不一，获得较多数量的MSCs仍有一定困难。因此，如何选择简单、实用、成本低廉的从人脐带血中分离培养得到最大比例MSCs的方法，直接应用于临床治疗，是急需解决的关键问题。