[发明专利]一种甲乙流感病毒检测的POCT荧光定量检测试方法

权利要求书

1.一种甲乙流感病毒检测的POCT荧光定量检测试方法，其特征在于：包括：步骤一、荧光微球标记抗甲乙流感病毒抗体；

步骤二、制备包被有抗甲乙流感病毒抗体的免疫层析试纸条；

步骤三、人体鼻咽部，咽部拭子洗脱液；

步骤四、进行病毒检测。

2.根据权利要求1所述的一种甲乙流感病毒检测的POCT荧光定量检测试方法，其特征在于：所述步骤一，用活化液替换微球原有保存液：离心－去上清－活化液超声重悬；加入EDC或者EDC+Sulfo-NHS进行活化，称取一定量的EDC和Sulfo-NHS，溶解后加入微球溶液中旋转反应15～20min。

3.根据权利要求2所述的一种甲乙流感病毒检测的POCT荧光定量检测试方法，其特征在于：所述步骤一，去除未反应或残余的反应物：离心－去上清－超纯水超声重悬，重复2～3次；用反应液超声重悬微球，然后加入一定量的待标记蛋白，避光反应1～4小时；去除未偶联的蛋白：离心－去上清－超声重悬，重复1～2次；封闭微球上未偶联的反应基团：用封闭液反应0.5～1小；用保存液重悬微球至原体积，2～8℃保存备用。

4.根据权利要求1所述的一种甲乙流感病毒检测的POCT荧光定量检测试方法，其特征在于：所述步骤二，采点膜仪将抗甲乙流感病毒抗体及羊抗鼠二抗喷涂在NC膜上，分别作为检测线(T线)与质控线(C线)，37℃干燥箱干燥过夜；同时将荧光微球标记抗甲乙流感病毒抗体偶联物冻干或者喷在结合垫上，30℃真空干燥2h；将NC膜、结合垫、样品垫、吸水纸及PVC粘性底板组装好后，切割成试纸条，加干燥剂于4～30℃密封保存，获取鼻咽部，或者咽部临床样品拭子，加入洗脱液中，手动震荡2～10min，按照1：1或者1：2和样品液混合，取50-70ul加入试剂卡样品孔进行检测。

5.根据权利要求1所述的一种甲乙流感病毒检测的POCT荧光定量检测试方法，其特征在于：所述步骤二中，将荧光微球标记抗甲乙流感病毒抗体偶联物喷在结合垫上，30℃真空干燥2h；将NC膜、结合垫、样品垫、吸水纸及PVC粘性底板组装好后，切割成试纸条，加干燥剂于4～30℃密封保存。

6.根据权利要求1所述的一种甲乙流感病毒检测的POCT荧光定量检测试方法，其特征在于：所述步骤三，用10mM～1M缓冲液加表面活性剂0.05％～1％(体积百分比)配制成洗脱液；所述的表面活性剂为Tween 20，Triton-100或十二烷基磺酸钠中的一种或两种以上，所述的缓冲液为磷酸盐缓冲盐水、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐或碳酸盐溶液。

7.根据权利要求1所述的一种甲乙流感病毒检测的POCT荧光定量检测试方法，其特征在于：所述步骤四，①取出所需免疫层析试纸条，室温放置15min；②每孔加入50-70ull校准品/质控品/样本，置于荧光检测仪孵育仓；③15min后，仪器自动检测，读取荧光值，以校准品浓度为横坐标，发光值为纵坐标，采用四参数逻辑拟合法得到标准曲线方程，根据标准曲线方程计算待检样本中甲乙流感病毒检测含量。