[发明专利]一种甲乙流感病毒检测的POCT荧光定量检测试方法

说明书

本发明公开了一种甲乙流感病毒检测的POCT荧光定量检测试方法，包括以下步骤：步骤一、荧光微球标记抗甲乙流感病毒抗体，用活化液替换微球原有保存液；去除未反应或残余的反应物；去除未偶联的蛋白；封闭微球上未偶联的反应基团；步骤二、制备包被有抗甲乙流感病毒抗体的免疫层析试纸条；步骤三、人体鼻咽部，咽部拭子洗脱液；步骤四、进行病毒检测，以校准品浓度为横坐标，发光值为纵坐标，采用四参数逻辑拟合法得到标准曲线方程，根据标准曲线方程计算待检样本中甲乙流感病毒检测含量。该发明可以用于病毒的早期诊断；快速、简便的诊断方法，短时间内得出结果，节省实验室的劳动力和成本。

技术领域

本发明涉及医疗检测技术领域，特别涉及一种甲乙流感病毒检测的POCT荧光定量检测试方法。

背景技术

流感是由流感病毒引起的传染性呼吸道疾病。流感病毒主要经空气飞沫传播，感染呼吸道，鼻子，喉咙和肺部，常引起发热、乏力、肌肉酸痛以及轻到中度的呼吸道症状，重者可致肺炎、心肌炎和心衰。流感病毒抗原检测试剂可用于流感的辅助诊断，甲型流感病毒各亚型的抗原类检测试剂还可用于区分季节性流感病毒和新型甲型流感病毒，并可获得关于流感暴发的流行病学信息。科学家们将流感病毒分类为A，B和C型，A型是最常见的并且通常是引起最严重的流行病。B型爆发也可能导致流行病，但是它产生的疾病通常比A型引起的疾病温和.C型病毒有从来没有与大流行病有关。流感A是最普遍的，并导致87％的感染，其余13％的报告病例为流感B。

流感抗原测试检测脱落在呼吸道和鼻腔分泌物中的病毒，流感患者主要在第1天至第3天大量脱落，有些儿童患者仍然在第7天有病毒脱落。因此，必须在感染性早期进行检测处理。目前，流感患者的确诊标准是病毒培养，是收集病毒，然后在组织中孵育培养至少5天，再用荧光标记或其他方法检测病毒方法。由于时间花费长，不利于及时治疗，为此，我们提出一种甲乙流感病毒检测的POCT荧光定量检测试方法来解决上述问题。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的是以特定的流感病毒抗原为检测目标，直接对人咽拭子、呼吸道洗液、抽吸液或其他呼吸道分泌物样本中的流感病毒进行体外定量检测。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：

一种甲乙流感病毒检测的POCT荧光定量检测试方法，包括以下步骤：包括：步骤一、荧光微球标记抗甲乙流感病毒抗体；

步骤二、制备包被有抗甲乙流感病毒抗体的免疫层析试纸条；

步骤三、人体鼻咽部，咽部拭子洗脱液；

步骤四、进行病毒检测。

进一步的，所述步骤一，用活化液替换微球原有保存液：离心－去上清－活化液超声重悬；加入EDC或者EDC+Sulfo-NHS进行活化，称取一定量的EDC和Sulfo-NHS，溶解后加入微球溶液中旋转反应15～20min。

进一步的，所述步骤一，去除未反应或残余的反应物：离心－去上清－超纯水超声重悬，重复2～3次；用反应液超声重悬微球，然后加入一定量的待标记蛋白，避光反应1～4小时；去除未偶联的蛋白：离心－去上清－超声重悬，重复1～2次；封闭微球上未偶联的反应基团：用封闭液反应0.5～1小；用保存液重悬微球至原体积，2～8℃保存备用。

进一步的，所述步骤二，采点膜仪将抗甲乙流感病毒抗体及羊抗鼠二抗喷涂在NC膜上,分别作为检测线(T线)与质控线(C线),37℃干燥箱干燥过夜；同时将荧光微球标记抗甲乙流感病毒抗体偶联物冻干或者喷在结合垫上，30℃真空干燥2h；将NC膜、结合垫、样品垫、吸水纸及PVC粘性底板组装好后，切割成试纸条，加干燥剂于4～30℃密封保存，获取鼻咽部，或者咽部临床样品拭子，加入洗脱液中，手动震荡2～10min，按照1：1或者1：2和样品液混合，取50-70ul加入试剂卡样品孔进行检测。