[发明专利]LP基因启动子区甲基化检测引物与检测方法及其应用

权利要求书

1.一种LP基因启动子区甲基化检测引物，其特征在于：包括用于LP基因启动子PCR扩增的上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列为：SEQ ID NO.1，所述下游引物的核苷酸序列为：SEQ ID NO.2。

2.一种LP基因启动子区甲基化的检测方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1，采集精神分裂症静脉血，提取基因组DNA；步骤2，重亚硫酸盐处理DNA样品，低速短暂离心备用；步骤3，以步骤2中的DNA为模板，使用SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2为引物扩增LP基因启动子，获得PCR扩增产物；步骤4，琼脂糖凝胶电泳检测扩增成功的样品；步骤5，将扩增成功的样品进行SAP反应；步骤6，T切/RNase A消化反应；步骤7，树脂纯化；步骤8，芯片点样；步骤9，将点样后的芯片使用MALDI-TOF分析，计算出DNA样品的甲基化程度。

3.如权利要求2所述的LP基因启动子区甲基化的检测方法，其特征在于：步骤1中采集精神分裂症的静脉血和药物治疗后的静脉血，分别提取基因组DNA，每种静脉血至少提取两个样本。

4.如权利要求2所述的LP基因启动子区甲基化的检测方法，其特征在于：步骤3中使用的PCR反应组分还包括双蒸水、10×PCR缓冲液、脱氧核苷、PCR扩增酶。

5.如权利要求4所述的LP基因启动子区甲基化的检测方法，其特征在于：PCR反应组分中各组分的含量为双蒸水6.4μL、10×PCR缓冲液1μL、脱氧核苷1μL、5U/μLPCR扩增酶0.2μL、10pmol/μL上游引物0.2μL、10pmol/μL下游引物0.2μL、DNA模板1μL；PCR反应程序为A-94℃处理4min、B-94℃处理20sec、C-59℃处理30sec、D-72℃处理1min、E-72℃处理3min、F-4℃处理不小于30min，其中B、C、D循环45次。

6.如权利要求2所述的LP基因启动子区甲基化的检测方法，其特征在于：步骤5中SAP的反应组分为去RNA酶双蒸水、SAP酶以及PCR产物。

7.如权利要求6所述的LP基因启动子区甲基化的检测方法，其特征在于：SAP的反应组分各组分的含量为去RNA酶双蒸水1.70μL、SAP酶0.30μL以及PCR产物5.00μL，SAP反应程序为37℃处理20min、85℃处理5min、4℃处理不小于30min。

8.如权利要求2所述的LP基因启动子区甲基化的检测方法，其特征在于：步骤6中T切/RNase A消化反应的反应组分为去RNA酶双蒸水、5×T7聚合酶缓冲液、T裂解混合液、二硫苏糖醇、T7 RNADNA聚合酶、核糖核酸酶以及PCR/SAP混合物。

9.如权利要求8所述的LP基因启动子区甲基化的检测方法，其特征在于：T切/RNase A消化反应的反应组分中各组分的含量为去RNA酶双蒸水3.21μL、5×T7聚合酶缓冲液0.89μL、T裂解混合液0.22μL、100mM二硫苏糖醇0.22μL、T7 RNADNA聚合酶0.40μL、核糖核酸酶0.06μL以及PCR/SAP混合物2.00μL。

10.一种LP基因启动子区甲基化的检测在以LP基因启动子区甲基化为靶点的药物以及预测精神分裂症患者入睡潜伏期延长中的应用。