[发明专利]LP基因启动子区甲基化检测引物与检测方法及其应用

说明书

本发明公开了LP基因启动子区甲基化检测引物与检测方法及其应用，包括一对LP基因启动子区甲基化特异性扩增引物，该发明可以方便快捷地在分子水平上实现对精神分裂症入睡潜伏期延长的预测，针对性强，同时，以LP基因启动子区甲基化为靶点的药物有望成为干预精神分裂症入睡潜伏期延长的一种新手段。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，特别是指一种LP基因启动子区甲基化检测引物与检测方法及其应用。

背景技术

精神分裂症(SCZ)是最常见的精神障碍。睡眠障碍是精神分裂症的重要诊断标准之一，也是精神疾病发生的预测信号。睡眠障碍与患者的低生命质量、社会功能缺陷、心血管疾病和高自杀率相关，其发生率为72.4％。

失眠是精神分裂症常见睡眠障碍，包括入睡潜伏期(SOL)延长、夜间觉醒增多、多梦、睡眠感缺乏与早醒等，其中入睡潜伏期延长是精神分裂症特异性的睡眠障碍。多导睡眠图是目前临床上检测各种睡眠障碍的标准方法，包括失眠和入睡潜伏期延长。然而，临床上尚缺乏预测精神分裂症患者出现入睡潜伏期延长的方法。因此，建立预测精神分裂症患者入睡潜伏期延长的技术方法，对精神分裂症的诊疗有重大意义。

50％精神分裂症(SCZ)患者表现出睡眠节律紊乱，精神分裂症患者的多导睡眠图显示睡眠各期时相转换增多，I期睡眠增加，睡眠效率及睡眠维持率降低；同时，精神分裂症患者有慢波睡眠减少，快速动眼(REM)潜伏期缩短，第1个睡眠周期中快速动眼睡眠时程延长，快速动眼密度增加及快速动眼活力增强等表现。快速动眼潜伏期缩短被认为是精神分裂症的神经生物学指标。睡眠障碍是难治性精神分裂症复发的危险因素，与患者的低生命质量、社会功能缺陷、心血管疾病和高自杀率相关，其发生率为72.4％。睡眠障碍是精神分裂症的重要诊断标准之一，也是精神疾病发生的预测信号。

瘦素(LP)通过下丘脑区及海马区的受体调节大脑发育及思维活动。精神分裂症患者血清LP水平比正常对照组明显降低。LP与精神分裂症本身发生有关，且LP升高诱导抗精神病药物引起的体重增加。抗精神病药物治疗引起LP mRNA表达与血清LP增加。LP缺陷大鼠的睡眠微觉醒次数增加，睡眠期转换次数增加，且有更为频繁及短暂的睡眠发作，非快速动眼睡眠时间增加。

用重组LP注入大鼠脑室发现，大鼠的快眼动睡眠明显减少达30％，而慢波睡眠增加了13％。根据美国睡眠基金会的调查，1/3美国成年人每晚睡眠少于7小时，造成LP下降。连续两天睡眠不足，LP就会降低18％。体内LP的缺乏可以干扰正常的睡眠节律和结构，减少深睡眠时间，即非快眼动睡眠；体内注射LP则增加睡眠深度，减少快速动眼睡眠时间。

精神分裂症出现睡眠障碍是一种由遗传因素和环境因素共同作用而引起的复杂性疾病，表观遗传修饰可以为环境因素与基因组的相互作用机理提供直接的解释。DNA甲基化最常见是的表观遗传学修饰，启动子区域甲基化抑制基因转录，表现为外周蛋白质水平降低。DNA甲基化调节基因表达，引起抑郁症的发生。精神分裂症、生物昼夜节律与睡眠障碍相关基因同样存在DNA甲基化差异。

发明内容

本发明提出一种LP基因启动子区甲基化检测引物与检测方法及其应用，对现有技术中精神分裂症预测具有重要作用。

本发明的技术方案是这样实现的：一种LP基因启动子区甲基化检测引物，包括用于LP基因启动子PCR扩增的上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列为：SEQ IDNO.1，所述下游引物的核苷酸序列为：SEQ ID NO.2。