[发明专利]肉苁蓉中四种成分制备工艺及其应用

权利要求书

1.一种从肉苁蓉中同时提取四种有效成分单体的方法，其特征在于，所述四种有效成分单体为松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、管花苷A，所述提取方法包括以下步骤：

1)水提：将肉苁蓉药材切为小块，加水浸泡1～3h，水煎煮提取，提取次数为2次，获得肉苁蓉水提液；

2)醇沉：将步骤1)获得的肉苁蓉水提液调整至密度为0.7～0.8的醇沉溶液，采用浓度为95％的乙醇醇沉除去步骤1)获得的肉苁蓉水提液中的多糖，使醇沉溶液的终浓度为50～70％，获得醇沉上清液，将醇沉上清液4℃静置12h，离心取上清液，减压回收乙醇，水液冷冻干燥得到醇沉上清液固形物；

3)纯化：采用大孔树脂对步骤2)所得的醇沉上清液固形物纯化，所述纯化条件为：将步骤2)所得的醇沉上清液固形物溶解于水，制成松果菊苷浓度为2.8mg/mL的均一澄清溶液，上样量5BV，上样流速1BV/h，先用水洗脱，水除杂体积10BV，洗脱流速2BV/h，得到水洗脱部位；25％乙醇洗脱体积15BV，洗脱流速4BV/h，得到25％乙醇洗脱部位；50％乙醇洗脱体积6BV，洗脱流速2BV/h，径高比1:8；收集25％乙醇洗脱部位，浓缩，挥去乙醇，获得纯化后的浸膏；

优选的，所述大孔树脂包括HPD-300、D-101-Ⅰ、D-101、HPD-100中一种或多种的混合；

进一步优选的，所述大孔树脂还包括NKA-9，将NKA-9与HPD-300、D-101-Ⅰ、D-101和HPD-100中的一种或多种混合；

更进一步优选的，选自HPD-300和NKA-9混合；

4)HPLC-DAD/MS组分自动收集系统同时提取四种有效成分单体：将步骤3)得到的纯化后的浸膏溶解于水，制成可完全溶解的最大浓度，取5mL注入HPLC-DAD/MS组分自动收集系统，分别将6min、9min、10min和16min色谱峰进行自动收集，挥干溶剂，分别获得松果菊苷、异毛蕊花糖苷、毛蕊花糖苷和管花苷A；

所述HPLC-DAD/MS组分自动收集系统色谱条件如下：

色谱柱：Shim-pack PRC-ODS 20×25cm；

流动相：甲醇-甲酸水(体积比45:55，所述甲酸水溶液中甲酸的体积分数为0.1％)

流速：3mL/min；

进样量：5mL；

检测波长：330nm。

2.根据权利要求1所述的从肉苁蓉中同时提取四种有效成分单体的方法，其特征在于，步骤1)中将所述肉苁蓉药材切为小于1cm³的小块，所述加水浸泡时间为1h。

3.根据权利要求1所述的从肉苁蓉中同时提取四种有效成分单体的方法，其特征在于，步骤1)中2次提取时间各为1h，料液比为1:11～12；优选的，料液比为1:11.85。

4.采用权利要求1所述的提取方法提取得到的肉苁蓉有效成分，其特征在于，所述肉苁蓉有效成分为步骤4)中得到的松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、管花苷A中的一种或多种的组合。

5.采用权利要求1所述的提取方法提取得到的肉苁蓉有效部位，其特征在于，所述有效部位为步骤3)中得到的25％乙醇洗脱部位。

6.权利要求4所述的肉苁蓉有效成分或权利要求5所述的肉苁蓉有效部位在在制备预防和/或治疗神经退行性疾病制剂中的应用。

7.权利要求4所述的肉苁蓉有效成分或权利要求5所述的肉苁蓉有效部位在在制备预防和/或治疗骨相关疾病制剂中的应用。