[发明专利]磁性固定化酵母细胞及其在制备（R）-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯中的应用

权利要求书

1.一种磁性固定化酵母细胞在不对称还原2-氧代-4-苯基丁酸乙酯制备(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述磁性固定化酵母细胞按如下方法制备：(1)将Fe₃O₄磁性颗粒与氨基酸水溶液超声分散后，使用外加磁场回收沉淀，沉淀洗涤后冻干，获得氨基酸修饰磁性纳米粒子；所述氨基酸为赖氨酸、精氨酸、谷氨酸或天冬氨酸；(2)将氨基酸修饰磁性纳米粒子与酵母细胞溶液混匀，20-40℃、130-170r/min摇床震荡中固定2-6h，反应结束后，磁分离，沉淀用去离子水洗涤后冻干，获得磁性固定化酵母细胞；所述酵母细胞为安琪酵母股份有限公司的耐高糖百钻高活性干酵母。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于步骤(1)所述Fe₃O₄磁性纳米颗粒与氨基酸水溶液中氨基酸质量比为1:1；所述氨基酸水溶液质量浓度为1g/L。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于步骤(1)所述超声分散条件为：20～50KHz超声30min。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于步骤(2)所述氨基酸修饰磁性纳米粒子与酵母细胞溶液中酵母细胞干重比为1:50-300；所述酵母细胞溶液是将酵母细胞与pH 7磷酸缓冲液充分混匀制成，所述缓冲液添加量以酵母细胞干重计为20ml/3g。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于步骤(2)所述冻干条件为：-80℃冰箱中预冻8h后，放入冷冻干燥机中冻干-65℃真空干燥12h。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述的应用以2-氧代-4-苯基丁酸乙酯乙醇溶液为底物，以pH9磷酸缓冲盐溶液为反应介质，以磁性固定化酵母细胞为催化剂构成转化体系，在20-45℃、50-250rpm条件下进行还原反应8～40h，反应液分离纯化，获得(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述底物浓度为0.1～0.5mmol/mL，所述底物与反应介质体积比为1:10；所述催化剂质量用量以缓冲液体积计为0.1-0.5g/mL。

8.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述应用在交变磁场中进行分批还原反应，所述分批还原反应为：在磁场频率为500Hz、磁场强度为4-20Gs的交变磁场中，将磁性固定化酵母细胞加入2-氧代-4-苯基丁酸乙酯乙醇溶液中，在20-45℃条件下进行还原反应，反应液分离纯化，获得(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯。

9.如权利要求6所述的应用，其特征在于所述应用在交变磁场中进行连续还原反应，所述连续还原反应为：在磁场频率为500Hz、磁场强度为4-20Gs的交变磁场中，将磁性固定化酵母细胞加入连续流反应器中，以25-500μL/min的速度流加2-氧代-4-苯基丁酸乙酯乙醇溶液至磁性固定化酵母细胞中，同时以25-500μL/min的速度将生成的产物回流加入底物中，在20-45℃条件下进行连续还原反应，反应液分离纯化，获得(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯。