[发明专利]一种D-二聚体检测试剂盒、制备方法及用途

说明书

本发明涉及一种D‑二聚体检测试剂盒、制备方法及用途。本发明的所述试剂盒包括：包被于磁性微球的第一株抗体、标记有示踪标记物的第二株抗体和校准品；所述第一株抗体和所述第二株抗体所识别的D‑二聚体的特异性结合位点不同；所述校准品包括含牛血清白蛋白的磷酸缓冲盐溶液。该试剂盒具有良好的灵敏度和特异性，反应时间短，能够快速得到检测结果，阴性符合率高，稳定性高，结合化学发光仪器可以实现快速自动化检测。

技术领域

本发明属于免疫检测领域，具体涉及一种D-二聚体检测试剂盒、制备方法及用途。

背景技术

D-二聚体(D-Dimer，DD)是纤维蛋白单体经活化因子XIII交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，是一个特异性的纤溶过程标记物。D-二聚体来源于纤溶酶溶解的交联纤维蛋白凝块。近十多年来，国内外的研究证实D-二聚体检测已成为临床诊断血栓性疾病的重要指标，主要用于筛查深静脉血栓(DVT)、肺栓塞(PE)、弥漫性血管内凝血(DIC)。另外，只要机体血管内有活化的血栓形成及纤维溶解活动，D-二聚体就会升高，因此，心肌梗死、脑梗死、手术、肿瘤、感染及组织坏死、肾脏疾病、器官移植排斥反应等均可导致D-二聚体升高。特别对老年人及住院患者，因患菌血症等病易引起凝血异常而导致D-二聚体升高。D-二聚体检测不仅对多种疾病的辅助诊断具有重要的临床意义，也具备巨大的市场前景。

目前，D-二聚体的免疫检测方法有多种，其中包括放射性同位素免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、胶体金免疫层析法(GICA)、荧光免疫层析法(FICA)、胶乳增强免疫比浊法(PETIA)及近年来逐渐被广泛使用的化学发光法(CLIA)等。

放射性同位素免疫分析法(RIA)是利用同位素标记的与未标记的抗原同抗体发生竞争性抑制反应的放射性同位素体外微量分析方法。但是放射性同位素免疫分析法(RIA)有时会出现交叉反应、假阳性反应，组织样品处理不够迅速，不能灭活降解酶和盐及pH有时会影响结果等问题。

酶联免疫吸附法(ELISA)检测原理，以双抗体夹心法为例，是在固相载体上包被一种特异性抗体，加入待测样本后，再加入酶标记的另一种抗体，形成双抗体夹心复合物，再通过发光底物的显色作用，使仪器可以定量检测出的免疫反应。但酶联免疫吸附法(ELISA)操作繁琐时间长、灵敏度低、线性范围窄和自动化程度低。

胶体金免疫层析法(GICA)作为POCT检验的一种方法，具有上样量少、简便快速的优点，适用于床旁检验。其原理如下，仍以双抗体夹心法为例，当含有抗原的样本滴加到吸收孔后，抗原先与胶体金标记的抗体结合形成抗原-抗体复合物，然后固定在样品垫上的另一种抗原会捕获该复合物，形成双抗体夹心复合物，并产生一个色带，而被检测到的免疫检测法。不过胶体金免疫层析法在灵敏度、线性范围、定量准确度等方面还有待改进。

荧光免疫层析法(FICA)相比于传统的免疫层析法区别在于以荧光微球代替胶体金作为抗体载体，既保留了传统胶体金层析试纸条的现场快速检测优点，又加入了荧光检测技术的高灵敏度特点，提高免疫层析方法检测性能。但荧光免疫层析法存在自动化程度低、检测通量较小的缺点。

胶乳增强免疫比浊法(PETIA)，传统的免疫比浊法基本原理是：当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂(聚乙二醇等)的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。胶乳增强免疫比浊法是在传统免疫比浊基础上，将抗体标记在乳胶微球上使抗原抗体结合物的体积增大，光通过之后，透射光和散射光的强度变化更为显著，从而提高试验的敏感性。胶乳增强免疫比浊法(PETIA)则存在检测灵敏度不高，线性范围较窄等缺点。