[发明专利]rhTSG-6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒及其使用方法和应用

权利要求书

1.一种重组人肿瘤坏死因子α诱导蛋白6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒，其特征在于，包括包被有抗rhTSG-6多克隆抗体的酶标板、酶标记rhTSG-6多克隆抗体、rhTSG-6蛋白标准品、样品稀释液、洗涤液、显色液A液、显色液B液、终止液；

所述rhTSG-6重组抗原的基因序列如SEQUENCE LISTING 400〈2〉所示。

2.根据权利要求1所述的重组人肿瘤坏死因子α诱导蛋白6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒，其特征在于，rhTSG-6多克隆抗体为rhTSG-6重组抗原免疫Balb/c小鼠得到的抗血清经多次纯化后得到的精制抗体。

3.根据权利要求1所述的重组人肿瘤坏死因子α诱导蛋白6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒，其特征在于，所述酶标记rhTSG-6多克隆抗体为rhTSG-6重组抗原免疫Balb/c小鼠的所获抗血清，经亲和层析法纯化后采用辣根过氧化物酶HRP标记。

4.根据权利要求1所述的重组人肿瘤坏死因子α诱导蛋白6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒，其特征在于，所述包被有抗rhTSG-6多克隆抗体的酶标板的制备方法为：将精制的rhTSG-6多克隆抗体经0.05M碳酸盐缓冲液稀释后包被酶标板中，4℃过夜，后用pH 7.0内含体积分数为10%小牛血清的0.01mol/L磷酸盐缓冲液封闭，洗涤拍干后装入包装袋抽真空保存。

5.根据权利要求1所述的重组人肿瘤坏死因子α诱导蛋白6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒，其特征在于，所述rhTSG-6蛋白标准品为rhTSG-6重组抗原与冻干保护剂混合，经冷冻干燥制备得到。

6.根据权利要求1所述的重组人肿瘤坏死因子α诱导蛋白6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒，其特征在于，所述样品稀释液为pH 7.0内含体积分数为10%小牛血清的0.01mol/L磷酸盐缓冲液；所述洗涤液为pH 7.0内含有体积分数为0.05% Tween-20的0.01mol/L的磷酸盐缓冲液。

7.根据权利要求1所述的重组人肿瘤坏死因子α诱导蛋白6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒，其特征在于，所述显色液A液为加入过氧化氢溶液；所述显色液B液为加入四甲基联苯胺溶液；所述终止液为2mol/L硫酸溶液。

8.一种非诊断目的的如权利要求1-7任意一项所述的重组人肿瘤坏死因子α诱导蛋白6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步骤：

（1）将rhTSG-6蛋白标准品以样品稀释液稀释成系列浓度的rhTSG-6蛋白标准品溶液；

（2）向包被有精制rhTSG-6多克隆抗体的酶标板中分别加入hTSG-6蛋白标准品溶液、待测样品样品液，按100μl/孔加入微孔酶标板内；于37℃温箱内静置30min；弃液，加入洗涤液200μl/孔，洗涤5次后拍干；

（3）加入1:30000稀释的酶标抗rhTSG-6多克隆抗体100μl/孔，于37℃温箱内静置30min；弃液，加入洗涤液200μl/孔，洗涤5次后拍干；

（4）加入显色液B液50μl/孔，再加入显色液A液50μl/孔，轻敲板框混匀，室温避光反应10min；

（5）加入终止液50μl/孔终止反应，并立即在酶标仪上测450nm处的吸光度值；

（6）以rhTSG-6蛋白标准品溶液浓度的负对数为横坐标，吸光度值对数为纵坐标，绘制标准曲线，求出线性回归方程，将待检样品孔内吸光度值带入标准曲线，即可求得待检测样品中rhTSG-6的浓度。

9.一种非诊断目的的重组人肿瘤坏死因子α诱导蛋白6的定量检测方法，其特征在于，利用权利要求1-7任意一项所述的重组人肿瘤坏死因子α诱导蛋白6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒进行定量检测。