[发明专利]rhTSG-6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒及其使用方法和应用

说明书

本发明公开了rhTSG‑6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒及其使用方法和应用，所述试剂盒包括包被有抗rhTSG‑6多克隆抗体的酶标板、酶标记的抗rhTSG‑6多克隆抗体、rhTSG‑6蛋白标准品、样品稀释液、洗涤液、显色液A液、显色液B液、终止液；通过抗原‑抗体特异性反应，以酶免疫技术为基础，建立并研制了直接定量竞争ELISA法检测发酵液、半成品、成品等及组织细胞样本中rhTSG‑6的方法学及可商品化试剂盒，可对相应产品研制及对临床样品样本进行特异性检测。本发明方法最低检测限可达1.2ng/ml，批内差异＜5％，批间差异＜10％；使用本发明方法对样品中rhTSG‑6定量检测的回收率为在90％～110％之间，显示该试剂盒对于生产企业进行产品质量控制及临床标本的检测具有重要的商业开发价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种rhTSG-6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒及其使用方法和应用。

背景技术

肿瘤坏死因子α刺激基因6(tumor necrosis factor-αstimulated gene 6，TSG-6)是一种炎症相关的分泌性蛋白，是由间充质干细胞或基质细胞(MSCs)对炎症信号的反应产生的，在多种炎症性疾病或类炎症性病理过程中呈高表达。现已知，TSG-6介导了许多免疫调节和组织修复过程，具有抗炎和组织保护作用，是一个正调节的功能蛋白。

大量研究表明，TSG-6蛋白具有抑制炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6等的表达、抑制中性粒细胞浸润等功能，发挥较强的抗炎作用。随着相关研究的进展，TSG-6蛋白效力已逐渐被生物医药领域重视。但目前市场暂无相应直接用于rhTSG-6产品和临床标本检测的试剂盒。本发明首次发现，重组人TSG-6(recombinant human TSG-6，rhTSG-6)在体内外均具有抗病毒活性。并以此发现研制了rhTSG-6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒，填补了此领域的空白。

发明内容

本发明提供了一种rhTSG-6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒及其使用方法和应用，其具有简便快速、成本低、特异性及灵敏性高等特点。

本发明采取的技术方案为：

一种重组人肿瘤坏死因子α诱导蛋白6双抗体夹心ELISA法定量检测试剂盒的研制，包括包被有抗rhTSG-6多克隆抗体的酶标板、酶标记的rhTSG-6抗多克隆抗体、rhTSG-6蛋白标准品、样品稀释液、洗涤液、显色液A液、显色液B液、终止液。

进一步地，抗rhTSG-6多克隆抗体为rhTSG-6重组抗原免疫Balb/c小鼠得到的抗血清经多次纯化后得到的精制抗体。

所述rhTSG-6重组抗原的基因序列如SEQUENCE LISTING 400〈2〉所示，其是通过对如SEQUENCE LISTING 400〈1〉所示的重组人TSG-6基因进行密码子优化获得的，优化前密码子适应指数(CAI)为0.73，优化后CAI为0.97，通过密码子优化可实现重组人TSG-6抗原蛋白的高效表达，表达量达到30％以上。

所述rhTSG-6重组抗原的氨基酸序列如SEQUENCE LISTING 400〈3〉所示。

所述酶标记抗rhTSG-6多克隆抗体为rhTSG-6重组抗原免疫Balb/c小鼠得到的抗血清经亲和层析法纯化后采用辣根过氧化物酶(HRP)标记。

所述包被有抗rhTSG-6多克隆抗体的酶标板的制备方法为：将精制后的抗rhTSG-6多克隆抗体经0.05M碳酸盐缓冲液稀释后包被酶标板中，4℃过夜后，用pH 7.0内含体积分数为10％小牛血清的0.01mol/L磷酸盐缓冲液封闭封闭，洗涤拍干后装入包装袋抽真空保存。

所述rhTSG-6蛋白标准品为rhTSG-6重组抗原与冻干保护剂混合，经冷冻干燥制备得到。