[发明专利]一种重组人纤连蛋白Ⅲ1-C及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 202010116877.2 | 申请日： | 2020-02-25 |
| 公开（公告）号： | CN111217903B | 公开（公告）日： | 2022-11-15 |
| 发明（设计）人： | 王明丽;徐艳艳;蒋敏之;吴博;周炜;何志远;夏兵兵 | 申请（专利权）人： | 芜湖天明生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/78 | 分类号： | C07K14/78;C12N15/70;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C12N5/071;A61K8/64;A61Q19/00;A61Q19/02;A61Q19/08 |
| 代理公司： | 芜湖安汇知识产权代理有限公司 34107 | 代理人： | 尹婷婷 |
| 地址： | 241000 安徽省芜湖市*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 重组 人纤连 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种重组人纤连蛋白Ⅲ1-C蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
（1）将重组人纤连蛋白Ⅲ1-C的基因插入到pET-32a中构建重组质粒rhFNⅢ1-C/pET32-a；所述重组人纤连蛋白Ⅲ1-C的基因序列如SEQUENCE LISTING 400〈3〉所示；
（2）将重组质粒转化导入表达载体BL21（DE3）中，在含氨苄青霉素的LB平板上筛选阳性克隆菌；
（3）将阳性克隆菌接种于含氨苄青霉素的培养液中进行发酵，培养至对数生长期，然后进行IPTG诱导表达，离心收集菌体蛋白；
（4）在冰浴中破碎菌体，然后进行离心，收集上清液，上清液经His-tag 亲和层析纯化、透析、无菌过滤，即可得到高浓度高纯度的重组人纤连蛋白Ⅲ1-C目的蛋白；
所述重组人纤连蛋白Ⅲ1-C目的蛋白浓度高达 1.0mg/mL以上，纯度在90%以上。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）之后还包括对阳性克隆菌进行PCR鉴定、双酶切鉴定的步骤。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）之后还包括对菌体蛋白表达方式进行鉴定的步骤。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）具体包括以下步骤：将在含氨苄青霉素的LB平板上的阳性克隆菌接种于100mL含100μg/mL的氨苄青霉素的培养液中进行发酵，培养至对数生长期即OD600在0.6～0.8时，加入千分之一的IPTG进行诱导表达10h，发酵结束后，7000r/min离心20min收集菌体蛋白沉淀。
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