[发明专利]一种重组人TSG-6基因、重组人TSG-6蛋白标准品及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种重组人TSG-6基因，其特征在于，所述重组人TSG-6基因的序列如SEQUENCELISTING 400〈2〉所示；所述重组人TSG-6基因编码的重组人TSG-6蛋白的效价为1.59×10³IU/mL。

2.一种重组人TSG-6蛋白标准品的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

（1）对如SEQUENCE LISTING 400〈1〉所示的重组人TSG-6基因进行密码子优化，获得如权利要求1所述的重组人TSG-6基因；

（2）将步骤（1）所得的重组人TSG-6基因亚克隆至pET-32a表达载体中并转化至BL21（DE3）大肠埃希菌中，涂布含氨苄青霉素的LB平板培养过夜，得到重组人TSG-6重组菌；

（3）将重组人TSG-6重组菌进行放大培养，并经IPTG诱导表达，然后收集菌体；

（4）将步骤（3）收集的菌体破碎，离心后收集沉淀，沉淀经洗涤、变性、复性即可得到重组人TSG-6蛋白粗制品；

（5）重组人TSG-6蛋白粗品经分离纯化后即可得到重组人TSG-6蛋白纯品；

（6）重组人TSG-6蛋白纯品与冻干保护剂混合后，经冷冻干燥，即可得到所述重组人TSG-6蛋白标准品。

3.根据权利要求2所述的重组人TSG-6蛋白标准品的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，还包括对LB平板上培养得到的单菌落进行PCR及BamH Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切鉴定的步骤，鉴定结果为阳性即说明重组人TSG-6重组菌构建成功。

4.根据权利要求2所述的重组人TSG-6蛋白标准品的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，放大培养所用的培养基为含100μg/mL氨苄青霉素的LB培养基；培养至OD值在0.6-0.8，然后经终浓度为1.0mM的 IPTG在30℃诱导表达5h。

5.根据权利要求2所述的重组人TSG-6蛋白标准品的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，所述分离纯化的方法为：将重组人TSG-6蛋白粗制品过滤处理后过His-tag亲和层析柱纯化，收集纯化后的重组人TSG-6蛋白透析，然后调节pH至5.0；再经阴离子交换层析柱纯化，即可得到所述重组人TSG-6蛋白纯品。

6.根据权利要求5所述的重组人TSG-6蛋白标准品的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，所述His-tag亲和层析柱纯化所用的洗脱液为50mMTris-Cl和500mM咪唑组成的混合液，其pH为 8.0。

7.根据权利要求2所述的重组人TSG-6蛋白标准品的制备方法，其特征在于，步骤（6）中，所述冻干保护剂为终浓度为甘油100mL/L、甘露醇0.12g/mL和蔗糖0.025g/mL组成的PBS混合液。