[发明专利]一种重组人TSG-6基因、重组人TSG-6蛋白标准品及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种重组人TSG‑6基因、重组人TSG‑6蛋白标准品及其制备方法和应用，本发明通过对已有的重组人TSG‑6基因进行优化后，克隆至pET‑32a表达载体中并转化至大肠杆菌中，培养后经诱导表达，经表达后的菌体经洗涤、变性、复性即可得到重组人TSG‑6蛋白粗品，再经分离纯化后得到重组人TSG‑6蛋白纯品，然后与冻干保护剂混合后，经冷冻干燥，制备得到所述重组人TSG‑6蛋白标准品；与现有技术相比，本发明通过密码子优化实现重组人TSG‑6蛋白的高效表达，并实现了重组人TSG‑6蛋白标准品的批量制备，以此为标准可使不同批次测定的重组人TSG‑6蛋白效价检测结果更为可靠可信。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种重组人TSG-6基因、重组人TSG-6蛋白标准品及其制备方法和应用。

背景技术

肿瘤坏死因子α刺激基因6(tumor necrosis factor-αstimulated gene 6，TSG-6)是一种炎症相关的分泌性蛋白，是由间充质干细胞或基质细胞(MSCs)对炎症信号的反应产生的，在多种炎症性疾病或类炎症性病理过程中呈高表达。现已知，TSG-6介导了许多免疫调节和组织修复过程，具有抗炎和组织保护作用，是一个正调节的功能蛋白。

TSG-6是由TNFAIP6(tumor necrosis factor-inducible gene 6 protein，TNFAIP6)基因编码，是Lee等在筛选肿瘤坏死因子α干预的人二倍体FS-4成纤维cDNA文库时发现的一个新基因。

TSG-6基因主要是由相邻的两个组件即Link组件和CUB组件组成，其中Link组件负责与信号分子识别，与透明质酸(hyaluronicacid，HA)、硫酸软骨素、蛋白多糖以及蛋白聚糖的G1链等结合，而CUB则作为功能区发挥其生物学作用。TSG-6基因启动子序列中存在激活物蛋白1(AP－1)和核因子白细胞介素(NF-IL6)结合位点，当受到TNF-α、白介素－1(IL-1)等致炎因子刺激后，该基因在成纤维细胞中表达显著增高，因此被认为是一个受TNF-α等炎症因子调节的基因。TSG-6基因位于人染色体2q23 3，mRNA全长1440bp，其编码的蛋白含有277个氨基酸残基，属于透明质酸结合蛋白家族，具有多种功能，包括抑制中性粒细胞移行，蛋白网络的调控等，是一个由TNF-α诱导的、参与多种炎症反应的基因，在多种炎症性疾病或类似炎症的疾病过程中呈高表达，通过与透明质酸、间α-蛋白酶抑制剂结合，介导炎性细胞的迁移、黏附，参与细胞外基质重塑，调节蛋白酶网络，是一个正调节的功能蛋白，在许多病理及生理过程中，以及炎症反应和组织重塑中扮演重要角色。

大量研究表明，TSG-6是一种效果明显的抗炎因子，在肝炎、关节炎、视网膜炎、组织损伤、瘢痕疙瘩等炎症过程中，TSG-6均能够抑制炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6等的表达，并且具有抑制中性粒细胞浸润等功能，发挥较强的抗炎作用。在机体遭受感染、创伤等侵害时，适度的炎症反应会有利于机体清除病原体，修复损伤。而如果炎症反应持续很长时间，程度剧烈，则会对机体有害。

虽然TSG-6的研究及其生物学功能得到日益重视，但至今尚未见到该重组蛋白具有抗病毒活性及其大批量制备其标准品的制备方法等报告。本发明首次发现，重组人TSG-6(recombinant human TSG-6，rhTSG-6)在体内外均具有抗病毒活性。填补了此领域的空白。

发明内容