[发明专利]ddi1、rad23和dsk2三基因缺失的弓形虫虫株及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种ddi1、rad23和dsk2三基因缺失的弓形虫虫株及其构建方法和应用，所述弓形虫虫株中同时缺失泛素‑蛋白酶体系统的三个穿梭蛋白基因：ddi1基因、rad23基因以及dsk2基因，获得ΔΔΔΔddi1rad23dsk2三基因缺失虫株，该虫株繁殖力降低且对小鼠的毒力下降，对弓形虫的感染具有良好的免疫保护效果，具有成为弓形虫病弱毒疫苗的潜力。

技术领域

本发明是关于基因工程领域，特别是关于一种ddi1、rad23和dsk2三基因缺失的弓形虫虫株及其构建方法和应用。

背景技术

龚地弓形虫(Toxoplasma gondii，简称弓形虫)是一种专性细胞内寄生原虫，隶属于顶复亚门，几乎感染所有的温血动物和人，是一种危害严重的人兽共患病原。弓形虫感染广泛，危害宿主的形式多样，对不同宿主、不同生长或生理阶段的危害程度也有很大差异。在宿主免疫力正常的情况下，大多为隐性感染；婴儿、免疫抑制患者感染弓形虫可能导致严重或致命的疾病，弓形虫感染还是导致妊娠动物和孕妇发生流产、死胎及其他繁殖生殖障碍的重要原因，在我国常有仔猪急性弓形虫病的报道。目前，弓形虫病的防治手段主要是磺胺类药物用于急性弓形虫病的治疗，但并不能彻底治愈弓形虫病。上个世纪九十年代，在欧洲有一种弱毒疫苗应用于预防绵羊弓形虫病引起的流产，但因为效果及其公共卫生问题，未能够广泛应用；迄今未见其它商品化疫苗应用于人和动物的弓形虫病预防。因此，研发弓形虫病疫苗具有重要应用价值。

DNA损伤诱导蛋白1(ddi1)、紫外剪切修复蛋白23(rad23)和泛素家族蛋白2(dsk2)都属于UBL-UBA穿梭蛋白家族，该家族蛋白是泛素-蛋白系统的重要组成成分，主要功能是识别和转运泛素化蛋白到蛋白酶体进行降解，这对于维持细胞内蛋白质及氨基酸的稳态具有重要作用，除此之外，还参与DNA损伤修复、细胞周期调控等生命过程，但迄今尚无其在弓形虫中的研究报道。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供一种ddi1、rad23和dsk2三基因缺失的弓形虫虫株，该虫株对小鼠的致病性显著减弱，经该虫株免疫的小鼠，能够抵抗弓形虫的再次感染。

为实现上述目的，本发明提供了一种ddi1、rad23和dsk2三基因缺失的弓形虫虫株(ΔΔΔddi1rad23dsk2)，所述弓形虫虫株中同时缺失泛素-蛋白酶体系统的三个穿梭蛋白基因：ddi1基因、rad23基因以及dsk2基因，其中，所述ddi1基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，所述rad23基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示，所述dsk2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。