[发明专利]一种磁珠法全血核酸提取裂解液、试剂盒及提取方法

说明书

本发明公开了一种磁珠法全血核酸裂解液，包括高浓度无机盐离子和高离序盐；所述裂解液pH为7以下。由高浓度无机盐配合高离序盐使用，在酸性缓冲条件下更好的实现磁珠悬浮在裂解液中，以达到裂解充分、快速的目的。

技术领域：

本发明属于生物技术领域，涉及一种基于磁珠法的全血核酸裂解液、试剂盒及应用，可应用于人全血DNA提取。本发明还涉及应用该试剂盒从全血样本中提取DNA的方法。

背景技术：

随着分子生物学技术的发展，基因组水平上的研究已成为热点。在分子遗传学和分子流行病学中，无论是全基因组关联分析(GWAS)、候选SNP位点基因分型，还是基因组文库的建立，都需要从大批量血液样本中提取基因组DNA。所抽提得到的DNA浓度、纯度和一级结构的完整性都会影响到后续的研究，因此高效、可靠的高通量DNA提取方法是分子遗传学基础研究迫切需要的。

传统的核酸抽提方法包括酚-氯仿法、盐析法、滤膜离心柱法等。这些方法各有优缺点，但都只适合用于人工提取，不适用于自动化操作。与传统的核酸纯化方法相比,以磁性复合微球为载体的核酸提取方法由于其利用磁性硅胶对DNA的特异性吸附，在磁场作用下分离并获取DNA，所以使其具有无需离心，避免交叉污染，结果重复性好、稳定性高、操作简单,适合于自动化操作等优点而成为一种非常有前景的提取方法。

磁珠法能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出DNA和RNA，可应用在疾病控制中心、临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、畜牧业和分子生物学研究等多种领域。但因为其提取效率不佳，纯度较低，提取时间长，成本高等问题，磁珠法核酸提取的应用受到一定的限制。因此，为了解决上述问题，本发明提出一种新的核酸提取裂解液。

核酸裂解是核酸提取中最初且最重要的一步，而其效果取决于裂解液的作用，性能优良的裂解液，不仅需要做到快速高效的裂解细胞，还需要使磁珠更好的分散在溶液中，实现更低磁珠用量达到更高核酸提取效率的目的，在降低成本的同时保证所提核酸的数量和质量。

发明内容:

技术问题：本发明的目的是提供一种基于磁珠法的全血核酸裂解液、试剂盒及应用，具体是裂解液提供一种高盐低PH的环境，快速裂解细胞、提高磁珠分散性，利用更少量的磁珠，实现对核酸的高效提取。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下

一种磁珠法全血核酸提取裂解液，其特征在于，所述裂解液包括高浓度无机盐离子和高离序盐，所述裂解液pH为7以下。

可选地，所述无机盐离子的浓度为1～4mol/L优选1.5～4mol/L。

优选地，所述高离序盐的浓度为2～6mol/L。

优选地，所述pH为5-7。

优选地，上述裂解液中的无机盐离子选自氯化钾，醋酸钠或柠檬酸钠中的一种或多种；高离序盐选自高离序盐选自盐酸胍、LiCl、硫氰酸胍、硫氰酸钾或NaClO₄中的一种或多种。

优选地，所述的裂解液，还包括缓冲液，作为优选，包括但不限于HEPES、Tricine、醋酸钠-醋酸或Tris-HCl的缓冲液。

优选地，所示裂解液还包括表面活性剂，作为优选，包括但不限于TRITON X-100、NP-40、tween 20、tween 80、SDS或月桂醇聚醚(更优选月桂醇聚醚-21)中的一种或多种。

可选地，所述缓冲液浓度为20～180mmol/L，所述表面活性剂浓度为25～150g/L。

本发明的另一个目的还在于提供一种含有所述裂解液的试剂盒。

所述试剂盒还包含洗涤液、洗脱液、磁珠悬液和蛋白酶K。

作为优选，磁珠选用超顺磁性氧化硅纳米微球。