[发明专利]酶的制造方法及酶

说明书

本发明提供一种酶的制造方法。本发明的酶的制造方法包括：获取复合体工序，将固体酶与高分子吸附材料于pH值为6～8的条件下接触，获得固体酶‑高分子吸附材料复合体；接触工序，使所述固体酶‑高分子吸附材料复合体与还原性糖接触；以及分离工序，从所述接触工序中得到的混合体系中分离得到所述酶，其中，所述高分子吸附材料包括选自由非极性大孔吸附树脂、非极性骨架高分子聚合物和非离子疏水性交联聚合物组成的组中的至少1种。本发明的制造方法可有效防止酶活降低，提供酶活高且酶活稳定性优异的酶，延长了酶的使用周期，并且制造工序简单，对工艺控制容易，能够满足高效率稳定生产的需要，有效降低了企业的生产成本。

技术领域

本发明涉及一种酶的制造方法，尤其涉及一种能够有效防止酶活降低且酶活稳定的酶的制造方法。

背景技术

脂肪酶是一类特殊的酰基水解酶，在油脂工业中有着重要的应用。将酶赋型在颗粒或者粉末载体上，可以用于油脂的酯化、酯交换等反应。在脂肪酶固定化过程中，较为常见的方法是以高分子吸附树脂或离子交换树脂为载体，通过其巨大的比表面积产生的剩余表面能量将脂肪酶吸附到其孔当中，例如美国专利申请号84306053.4采用酚醛骨架的离子交换树脂对米黑根毛霉产脂肪酶进行固定，然后用于油脂改性。在实际操作过程中，固定化酶所用酶液一般采用商品酶液，商品酶液中含有大量保护剂(一般为甘油、丙二醇等)，这些物质虽然能起到保护酶的作用，但也会被带入到固定化酶中参与反应，生成甘二酯、丙二醇酯等副产物难以去除，影响生产。

固定化脂肪酶Lipozyme TL IM是在油脂工业被广泛使用的一种固定化脂肪酶，该固定化脂肪酶中包含的脂肪酶是TLL(Thermomyces lanuginose)，载体为硅胶，由丹麦诺维信公司生产。该固定化脂肪酶价格便宜，活力好，适用于各种类型的反应，但是其缺陷在于容易失活，重复利用性较差。例如，非专利文献1中以甘三酯为底物，10％W/W的酶添加量，反应时间为24h，Lipozyme TL IM反应一次以后第二次只剩余10％的酶活。非专利文献2中以葵花籽油为底物，分批添加甲醇，反应时间为24h，Lipozyme TL IM经过8批反应后，酶活不到30％。

由于固定化脂肪酶在应用过程中会发生酶活降低的情况，目前已采用各种方法来延长酶的使用寿命。例如，专利文献1公开了一种脂肪酶活性的恢复方法，其将使用过的固定化脂肪酶用助滤剂过滤后，调整其中油分的含量和水含量，可以起到恢复酶活的作用。

另外，油脂的微量无机酸含量、过氧化物也会影响酶活。例如，2009年10月的inform杂志中报道了油脂要达到酶反应所需要的过氧化值的标准：PV5。然而，在实际应用中，油脂、尤其是脂肪酸在高温情况下不可避免地被氧化，所产生的过氧化物会不可避免地使酶失活。

因此，目前仍缺少一种可靠的固定化方法保证酶在使用过程中避免失活，对固定化脂肪酶要求进一步地改良。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：CN103732741A

非专利文献

非专利文献1：Bioresource Technology,99(2008)277-286,Different enzymerequirements for the synthesisi of biodiesel Novozyme 435and Lipozyme TL IM

非专利文献2：enzyme and Microbial Technology,33(2003)97-103,Improvement in lipase-catalyzed synthesis of fatty acid methyl esters fromsunflower oil

发明内容

发明要解决的问题