[发明专利]一种日本血吸虫可溶性虫卵抗原组分的分离鉴定方法

说明书

本发明提供一种日本血吸虫可溶性虫卵抗原组分的分离鉴定方法，包括以下步骤：将S. japonicum虫卵研磨，用灭菌生理盐水配成5%悬液，置4℃浸泡3天，期间于‑20℃和室温间反复冻融10次，然后超声裂解，离心取上清液备用；将上清液过葡聚糖凝胶柱，然后收集分离得到的抗原组分，‑20℃保存备用；将收集的抗原组分在PVDF膜上点样，室温放置1小时，然后将膜置于1%BSA(W/V)的PBST中4℃过夜封闭，PBST洗膜3次，再与S. japonicum阳性病牛血清室温振荡作用1小时，PBST洗膜3次，再与羊抗牛IgG‑hrp室温振荡作用1小时，PBST洗膜3次，ECL化学发光显色进行鉴定。

技术领域

本发明属于蛋白质分离鉴定技术领域，具体涉及一种日本血吸虫可溶性虫卵抗原组分的分离鉴定方法。

背景技术

血吸虫病(Schistosomiasis)是一种危害严重的人畜共患寄生虫病，全球血吸虫病人在2亿以上，受威胁的流行区人口为7亿多。日本血吸虫（Schistosoma japonicum）是导致血吸虫病的三种病原体之一。建国初期，日本血吸虫病曾在我国12个省（江苏、浙江、安徽等）的454个县、市、区广泛流行，给人民健康和畜禽生产带来严重危害和巨大损失，经过多年来的不懈努力，我国血吸虫病的防治工作取得举世瞩目的成就，血吸虫病人数从解放初期的1100多万下降至41.3万，家畜感染率也由3.60%（2005年）下降至1.08%（2010年），据估计血吸虫病家畜约1.5万（其中病牛占80.04%），钉螺面积也降低至37.2亿平方米。然而，S. japonicum易感宿主广泛（涉及40多种哺乳动物），传染源和中间宿主尚不能有效根除，日本血吸虫病仍面临着随环境气候变化而死灰复燃的可能性，其诊断和防治工作仍然不能松懈。快速有效诊断是血吸虫病及时防治的前提，日本血吸虫病诊断方法可概括为病原形态学、分子生物学和免疫学三大类。其中，病原形态学诊断是最为经典，但费时、费力，漏检率较高，不适合家畜血吸虫病的普查，而分子生物学方法因操作复杂且需要昂贵设备仅限于实验室使用；免疫学诊断方法是目前家畜血吸虫病普查最常用的方法，其诊断抗原通常为S. japonicum可溶性虫卵抗原（soluble egg antigen,SEA），这与虫卵能够诱导宿主产生高水平TH2型免疫应答和特异性抗体密切相关。然而，SEA组分复杂，在实际应用时易与其他寄生虫抗原发生交叉反应而降低其特异度。因此，深入分析并鉴定S. japonicum特别是SEA组分的免疫特异性，是获取特异性诊断抗原并对其基因进行克隆、表达的前提工作。但目前，尚未有对日本血吸虫SEA组分进行分离鉴定的研究报道。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供一种日本血吸虫可溶性虫卵抗原组分的分离鉴定方法。本发明的技术方案为：

一种日本血吸虫可溶性虫卵抗原组分的分离鉴定方法，包括以下步骤：

步骤1，样品制备：将S. japonicum虫卵研磨，用灭菌生理盐水配成5%悬液，置4℃浸泡3天，期间于-20℃和室温间反复冻融10次，然后超声裂解，12000rpm离心1小时，取上清液备用；

步骤2，样品分离：将步骤1制备的上清液过葡聚糖凝胶柱，然后收集分离得到的抗原组分，-20℃保存备用；