[发明专利]一种肠道厌氧微生物培养瓶及其制备方法

说明书

本发明公开了一种肠道厌氧微生物培养瓶及其制备方法，该培养瓶包括密封封装的培养瓶和灌装在培养瓶内的培养液；依次通过将基础培养基溶液、L‑半胱氨酸盐水溶液和刃天青水溶液按比例混合得到的基础培养液灌装至培养瓶中并密封封装；对密封的培养瓶进行高压灭菌；最后将1640培基液、BI血清、维生素K和氯化血红素按比例混合得到活性添加剂混合液注入高压灭菌并降至室温的培养瓶中完成制备；该厌氧微生物培养瓶采用培养瓶瓶体及封装件、配制培养液的各组分均采用市售产品，原料易于获得，实现了降低厌氧培养的门槛和成本，让厌氧培养、储存和运输的操作都更为简单，且制备方法简单易行，符合大规模生产的要求，且满足医院、科研单位的使用需求。

技术领域

本发明涉及微生物培养技术领域，特别涉及一种肠道厌氧微生物培养瓶及其制备方法。

背景技术

目前大部分环境中存在的微生物都无法培养，可培养的微生物约占总数量的1％左右，之所以不能被培养，除了丰度较低以外，还包括培养条件不够优化，包括温度、pH、氧气利用率、营养等。从技术上来说，温度可以调节，pH也可以调节，一般难度就在厌氧处理和营养上；因此，厌氧微生物在体外培养过程的重点在于厌氧环境及其营养环境的模拟。

目前，研究中常用的厌氧培养技术，用厌氧箱，厌氧袋，厌氧罐，操作繁琐，成本较高，对于固体培基，涂布完板子，可以在厌氧箱，厌氧袋，厌氧罐中培养，但是用液体培基增殖时，开放的空间反而不方便操作，之前有研究人员解决了厌氧环境的问题，但是厌氧瓶中营养不够，微生物还是生长不好。本发明开发的厌氧培养瓶，在除氧的基础上，添加上具有活性的营养物质，保证微生物的生长，并且操作方便，成本低廉，适合广大微生物研究的技术人员具体实施。

此外，厌氧菌的保存也一直是个大问题，如果按照正常的细菌冻存方法，肯定要跟氧气接触，除非是在厌氧箱中操作，但是厌氧箱制备无氧环境麻烦，带着橡胶手套操作也不方便，此外还需要额外准备无氧冻存液。另外，厌氧菌的运输目前都是采用将细菌在特定条件下制作成干粉，然后装在安瓿瓶中除氧密封，在到达目的地以后，重新活化的方法。对于长距离的运输，这种干粉的处理方式很合适，但是短距离的运输，这样操作性价比就不高了，从一个实验室到另外一个实验室，厌氧菌的运输只能依靠厌氧袋和厌氧罐的转移，不太方便。

发明内容

本发明的目的是提供一种便于肠道厌氧微生物的培养、储存和运输的厌氧微生物培养瓶。

本发明的另一目的是提供上述肠道厌氧微生物培养瓶的制备方法

为此，本发明技术方案如下：

一种肠道厌氧微生物培养瓶，包括密封封装的培养瓶和灌装在培养瓶内的培养液；其中，培养液包括由以体积份计的100份基础培养基水溶液、4份2.5wt.％的L-半胱氨酸盐水溶液和0.1份0.1wt.％的刃天青水溶液混合得到的基础培养液，以及体积份数为基础培养液的4％的活性添加剂混合液配制而成；活性添加剂混合液由以体积份计的10份1640培基液、1份BI血清、1份维生素K和1份氯化血红素混合而成。

该肠道厌氧微生物培养瓶是密封的，完全满足厌氧环境，而培养液则用于为厌氧微生物提供适宜的营养环境；其中，培养液中的L-半胱氨酸具有较强的还原性，其与密封封装的培养瓶中氧气在高温作用下发生氧化反应，生成L-胱氨酸，除氧同时还进一步提供了满足微生物培养的氨基酸；刃天青为氧气指示剂，其用于指示瓶中的氧气含量，有氧气则为粉红色或浅蓝色，便于观察培养瓶内部状态是否满足厌氧培养环境的要求；而活性添加剂混合液对基础培养液进行营养补充，经实验验证，该活性添加剂能够满足大多数厌氧微生物的生长。

优选，所述培养液的灌装体积为培养瓶容积的90％～95％。

优选，所述基础培养基为粉末状的RAM基础培养基、CDC基础培养基、RCM基础培养基或MRS基础培养基。