[发明专利]一种全人源化抗破伤风双特异性抗体及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种全人源化抗破伤风双特异性抗体，其特征在于，该双特异性抗体包括单链单元A和单链单元B；单链单元A称为A链，单链单元B称为B链，A链和B链均为融合肽，融合肽的基本结构包含单链可变片段scFv、铰链区和Fc片段；A链的单链可变片段scFv对破伤风类毒素的以Trp1289为中心的区域具有特异性结合能力，B链的单链可变片段scFv对破伤风类毒素的以Arg1216为中心的区域具有特异性结合能力；所述单链可变片段scFv由轻链可变区通过(GGGGs)_n短肽和重链可变区相连接而成，其基本结构如VL一(GGGGs)₃一VH；A链和B链的铰链区通过一个或多个二硫键相连接；A链人IgG1 Fc片段和B链人IgG1 Fc片段通过隆突一入一穴结构连接；所述A链的单链可变片段ScFv为如SEQ ID No.10所示的氨基酸序列；所述B链的单链可变片段ScFv为如SEQ ID No.12所示的氨基酸序列,并对Fc片段的C_H3区域的氨基酸进行突变，一条链表达突变体S354C/T366W，一条链表达突变体Y349C/T366S/L368A/Y407V,从而形成隆突一入一穴，提高了异源化的抗体形成。

2.根据权利要求1所述的全人源化抗破伤风双特异性抗体的构建方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：

(1)分别将A链构建到第一表达载体上，将B链构建到第二表达载体上；

(2)将两种表达载体一起共转染到细胞中，培养并取上清；

(3)将表达上清分离得到纯化后的双特异性抗体，所述的分离步骤包括：亲和层析柱从表达上清中捕获所有带Fc结构域的抗体，通过SP阳离子交换层析和Q柱纯化，最后超滤置换缓冲液。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，所述第一表达载体为pCHO1.0，所述第二表达载体为经过抗性改造后的pCHO1.0-潮霉素。

4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述细胞为CH0-S细胞。

5.根据权利要求1所述的双特异性抗体在制备检测破伤风类毒素抗原的质量的诊断试剂中的应用。

6.根据权利要求1所述的双特异性抗体在制备预防和治疗破伤风的药物中的应用。