[发明专利]一种微生物快速定性定量的试剂盒以及快速定性定量的方法

权利要求书

1.一种微生物快速定性定量的试剂盒，其特征在于，包含定量反应体系和定性反应体系；所述定性反应体系包含蛋白A磁珠、抗体B、磁架、HRP-二抗、洗脱液；

定量反应体系包含蛋白A磁珠、抗体B、磁架、洗脱液、RNA提取试剂、聚合酶、反转录酶、扩增缓冲液、dNTPs、扩增引物；

所述蛋白A为微生物靶向人体细胞的受体蛋白；

所述抗体B为特异性识别结合微生物表面外壳蛋白的IgG抗体；

所述蛋白A和抗体B与待检测微生物特异性结合形成三元复合体；

使用方法为：

(1)向待测溶液中加入蛋白A-磁珠和抗体B，混合孵育，使抗体B和磁珠上的蛋白A特异性结合在待微生物上；分离蛋白A-磁珠/微生物/抗体B的复合物；

(2)蛋白A-磁珠/微生物/抗体B的复合物中加入特异性识别结合抗体B的HRP-二抗，再加入HRP的催化底物，通过观察颜色变化，实现微生物的定性检测；

(3)将步骤2)定性检测阳性的蛋白A-磁珠/微生物/抗体B复合物进行RT-PCR扩增，对微生物进行定量分析。

2.根据权利要求1所述微生物快速定性定量的试剂盒，其特征在于，所述的蛋白A磁珠由以下方法制备而成：

称取200mg蛋白A，169.31mg EDC和47.98mg NHSS，分别溶于无菌的PBS溶液中，然后混合通过碳化二亚胺法，活化蛋白A，活化10min；将活化后的蛋白A加入到牛血清白蛋白修饰的磁珠中，孵育6h；反应完毕后，用无菌的PBS洗涤3次，重悬于10mL无菌的PBS溶液中，即得浓度为20mg/mL的蛋白A包裹磁珠。

3.权利要求2所述微生物快速定性定量的试剂盒，其特征在于，所述的磁珠为四氧化三铁磁珠。

4.根据权利要求1～3任一项所述微生物快速定性定量的试剂盒，其特征在于，所述微生物为食源性致病菌、冠状病毒、流感病毒、乙肝病毒中的任意一种。

5.一种微生物快速定性定量的方法，其特征在于，步骤如下：

(1)向待测溶液中加入蛋白A-磁珠和抗体B，混合孵育，使抗体B和磁珠上的蛋白A特异性结合在待微生物上；分离蛋白A-磁珠/微生物/抗体B的复合物；

(2)蛋白A-磁珠/微生物/抗体B的复合物中加入特异性识别结合抗体B的HRP-二抗，再加入HRP的催化底物，通过观察颜色变化，实现微生物的定性检测；

(3)将步骤2)定性检测阳性的蛋白A-磁珠/微生物/抗体B复合物进行RT-PCR扩增，对微生物进行定量分析；

所述蛋白A为微生物靶向人体细胞的受体蛋白；

所述抗体B为特异性识别结合微生物表面外壳蛋白的IgG抗体。

6.根据权利要求5所述微生物快速定性定量的方法，其特征在于，所述的蛋白A磁珠由以下方法制备而成：

称取200mg蛋白A，169.31mg EDC和47.98mg NHSS，分别溶于无菌的PBS溶液中，然后混合通过碳化二亚胺法，活化蛋白A，活化10min；将活化后的蛋白A加入到牛血清白蛋白修饰的磁珠中，孵育6h；反应完毕后，用无菌的PBS洗涤3次，重悬于10mL无菌的PBS溶液中，即得浓度为20mg/mL的蛋白A包裹磁珠。

7.权利要求6所述微生物快速定性定量的方法，其特征在于，所述的磁珠为四氧化三铁磁珠。

8.根据权利要求5～7任一项所述微生物快速定性定量的方法，其特征在于，所述微生物为食源性致病菌、冠状病毒、流感病毒、乙肝病毒中的任意一种。