[发明专利]一种荔枝果肉中次甘氨酸A和α-亚甲环丙基甘氨酸的检测方法

权利要求书

1.一种荔枝果肉中次甘氨酸A和α-亚甲环丙基甘氨酸的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

a.液氮冷冻并粉碎荔枝果肉样品；

b.取步骤a粉碎的荔枝果肉样品，加入水或甲醇水溶液，混匀，超声萃取，离心取上清液，得到次甘氨酸A和α-亚甲环丙基甘氨酸提取液；

c.将步骤b所得到的次甘氨酸A和α-亚甲环丙基甘氨酸提取液用高效液相色谱-电喷雾串联质谱联用技术检测；

所述的高效液相色谱的条件为：色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18，3.0*100mm,1.8μm；流动相为乙腈和体积分数0.1％甲酸水溶液，乙腈和体积分数0.1％甲酸水溶液的体积比为5：95；流速：0.3mL/min；进样量：2μL；所述的电喷雾串联质谱的条件为：离子喷雾电压：3500V；鞘气流速：20Arb，辅助气流速：2Arb，扫气流速：0Arb；离子转移管温度：325℃，汽化器温度：275℃；

采用外标法进行定量测定，收集与次甘氨酸A和α-亚甲环丙基甘氨酸标准品保留时间和特征离子均一致的峰的洗脱液进行测定；次甘氨酸A的保留时间为2.41min，α-亚甲环丙基甘氨酸的保留时间为1.71min，二者保留时间允许的误差为±0.05min；次甘氨酸A的特征碎片峰m/z 142.1→74.2，m/z 142.1→96.1；α-亚甲环丙基甘氨酸m/z 128.1→82.2，m/z128.1→110.1；二者允许接受的荷质比偏差为0.05；最终得到荔枝果肉样品中的次甘氨酸A和α-亚甲环丙基甘氨酸含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的采用外标法进行定量测定包括以下步骤：

将次甘氨酸A和α-亚甲环丙基甘氨酸标准品溶于质量分数10％色谱级甲醇水溶液，分别配制成0.02～20mg/kg、0.04～2mg/kg系列浓度的标准曲线工作液；采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱对标准曲线工作液进行检测，分别提取次甘氨酸A和α-亚甲环丙基甘氨酸对应分子量的总离子流图，计算保留时间前后0.5min处的峰面积；以标准品物质浓度作横坐标，峰面积作纵坐标，根据浓度与峰面积的关系进行线性回归分析，绘制标准曲线，用于外标法测定；

所述的次甘氨酸A和α-亚甲环丙基甘氨酸对应分子量的总离子流图中，用于次甘氨酸A定量的特征离子对：m/z 142.1→74.2，碰撞能量为10.253V；用于次甘氨酸A定性的特征离子对：m/z 142.1→96.1，碰撞能量为10.253V；用于α-亚甲环丙基甘氨酸定量的特征离子对：m/z 128.1→82.2，碰撞能量为10.250V；用于α-亚甲环丙基甘氨酸定性的离子对：m/z128.1→110.1，碰撞能量为10.250V。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤b的甲醇水溶液是用色谱级甲醇配制的质量分数为10％的甲醇水溶液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤b的超声萃取，是在30～40℃下，超声萃取0.5～1.5h；所述的步骤b的离心，离心力为10000～20000g，离心时间为5～15min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤b中是以1g荔枝果肉样品﹕2～4mL水或甲醇水溶液的比例混匀进行提取的。

6.权利要求1所述的荔枝果肉中次甘氨酸A和α-亚甲环丙基甘氨酸的检测方法在不同荔枝品种果肉有毒氨基酸检测中的应用。