[发明专利]一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法及在白介素6检测中的应用

说明书

本发明公开了一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法，将抗体与荧光微球偶联得到抗体‑荧光微球偶联物，将抗体‑荧光微球偶联物再次与荧光微球偶联，得到的增强型抗体‑荧光微球偶联物作为免疫层析标记物。该方法通过将已标记好的抗体‑荧光微球偶联物再次偶联，使同一个抗体能携带更多的荧光微球，大大提升检测线上的荧光物质强度，提高试剂灵敏度。本发明还公开该方法白介素6检测中的应用。

技术领域

本发明涉及免疫层析技术领域，具体涉及一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法及在白介素6检测中的应用。

背景技术

免疫层析技术，也称测流免疫法(Lateral flow immunoassay)，起源于上世纪80年代，是建立在层析膜上以抗原抗体特异性反应为基础的免疫检测技术，以其快捷简便、间隔低廉、灵敏度高等优势而广泛运用于并于病原体检测、食品安全测量、环境监测等方面，其中以胶体金免疫层析技术发展最为成熟，但多局限于定性或半定量检测。伴随着材料科学和生物工程技术的蓬勃发展，新型荧光层析技术已逐渐在定量检测领域站稳脚跟。在当前的荧光层析研究中，提升荧光物质标记灵敏度是提升产品性能的关键点。

当前的抗体-荧光微球偶联一般采用化学偶联，先将微球表面基团(一般是羧基)活化，加入抗体，抗体的氨基与活化后的羧基结合，固定至微球表面，再使用惰性蛋白(一般是BSA)进行将微球表面空位进行封闭。荧光层析的标记灵敏度低是普遍存在的痛点。灵敏度由捕获在检测线上的荧光物质强度所决定，而现有的抗体-荧光微球偶联技术，通常都是很多个抗体对应一个荧光微球，因此检测线在捕获抗体-荧光微球偶联物时，捕获很多抗体才能有一个荧光微球的荧光强度。

IL-6主要由巨噬细胞、T细胞、B细胞等多种细胞产生，是一种多功能的细胞因子，调节免疫应答、血细胞生成、组织损伤时的急性时相反应、炎症反应等。在心脑血管疾病、肾脏疾病、肿瘤、关节炎、创伤、感染等疾病发生时，IL-6水平增高。IL-6上升的水平与疾病的活动期、肿瘤的发展变化、排斥反应程度以及治疗效果都密切相关。因此，对病人体液中IL-6水平的检测可反映患者的病情变化。罗氏白介素6检测试剂盒参考值范围＜7pg/ml，最低检出限＜2pg/ml，是一个对试剂灵敏度要求很高的项目。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明公开一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法，该方法通过将已标记好的抗体-荧光微球偶联物再次偶联，使同一个抗体能携带更多的荧光微球，大大提升检测线上的荧光物质强度，提高试剂灵敏度。本发明还公开该方法白介素6检测中的应用。

本发明通过下述技术方案实现：

一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法，将抗体与荧光微球偶联得到抗体-荧光微球偶联物，将抗体-荧光微球偶联物再次与荧光微球偶联，得到的增强型抗体-荧光微球偶联物作为免疫层析标记物。

现有的抗体-荧光微球偶联技术，通常都是很多个抗体对应一个荧光微球，因此检测线在捕获抗体-荧光微球复合物时，捕获很多抗体才能有一个荧光微球的荧光强度。

本发明通过将已标记好的抗体-荧光微球复合物再次偶联，使同一个抗体能携带更多的荧光微球，大大提升检测线上的荧光物质强度，提高试剂灵敏度。

一种提升免疫层析标记物灵敏度的方法在白介素6检测中的应用，标记物的制备方法如下：

(1)将抗IL-6单克隆抗体(抗IL-6单克隆抗体1)与荧光微球偶联，得到IL-6抗体-荧光微球偶联物；

(2)将IL-6抗体-荧光微球偶联物再次与荧光微球偶联，得到增强型IL-6抗体-荧光微球偶联物。

其中，步骤(1)中，IL-6抗体-荧光微球偶联物的制备方法如下：

(11)取出荧光微球放入离心管中离心，沉降、去除上清；