[发明专利]一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种测定胃泌素17含量的试剂盒，其特征在于：包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物；所述校准品、所述质控品、所述抗试剂、所述磁微粒试剂和所述发光底物分别独立地包装；

所述校准品通过在1L新生牛血清中加入0.01～0.05g的四环素和0.1～0.5g的硫酸新霉素，完全溶解后经过滤膜处理制备而成；

所述质控品通过用所述校准品溶解胃泌素17抗原制备而成；

所述抗试剂通过包括如下步骤的操作制备而成：

Sa1：将10～20g的Na₂PO₃H·12H₂O、1～2g的NaPO₃H₂·12H₂O、1～5g的绵羊血清、3～10g的新生牛血清、1～5g的马血清加入1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解，用HCl调节pH至5～6，制得抗试剂缓冲液；

Sa2：用所述抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液，向胃泌素17抗体中加入所述胃泌素17抗体质量1.1～1.5倍的所述异硫氰酸荧光素溶液并充分混合，使用pH为8～9的碳酸盐缓冲液平衡，然后使用凝胶层析分离纯化，制得异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体：

Sa3：用所述抗试剂缓冲液将碱性磷酸酶配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的碱性磷酸酶溶液，用胃泌素17抗体和碱性磷酸酶分别将反应基团活化后按照摩尔比为所述碱性磷酸酶：所述胃泌素17抗体为1:1～1:3的反应比，在催化剂的催化下充分混匀进行偶联反应，充分反应后，使用Tris缓冲液平衡，凝胶柱进行不同分子大小片度的分离纯化，制得碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体；

Sa4：将所述异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体与所述碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体加入含有表面活性剂的磷酸盐缓冲液中，充分混合即得；

所述磁微粒试剂通过将抗异硫氰酸荧光素抗体与羧基磁珠偶联制备而成；

所述发光底物通过将ALPS溶解于发光底物缓冲液中制备而成。

2.根据权利要求1所述的测定胃泌素17含量的试剂盒，其特征在于：还包括清洗液，所述清洗液通过将150～170gNaCl、3～5gKCl、24～24.4g三羟甲基氨基甲烷、0.8～1.2mL吐温20溶于900ml双蒸水中，再用HCl调整至pH7.2～7.6，最后用双蒸水定容至1000ml制备而成。

3.根据权利要求1或2所述的测定胃泌素17含量的试剂盒，其特征在于：Sa4中所述表面活性剂为Tween20、TritonX-100、Bronidox中的一种或多种，所述表面活性剂的添加量为0.01％～0.5％。

4.根据权利要求1或2所述的测定胃泌素17含量的试剂盒，其特征在于：所述磁微粒试剂通过包括如下步骤的操作制备而成：

Sb1：将充分混匀后的羧基磁珠浓缩液在磁场内放置15～20min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清，向所述羧基磁珠中加入所述羧基磁珠体积2～5倍的磁微粒缓冲液，震荡清洗20～30min后在磁场内放置15～20min再吸去上清；重复清洗羧基磁珠1～3遍；最后将羧基磁珠混合液定容到10～50mg/mL，制得羧基磁珠溶液；

Sb2：向所述羧基磁珠溶液中加入所述羧基磁珠溶液质量0.8％～1.2％的抗异硫氰酸荧光素抗体，在2～8℃内保持混匀状态反应16～20h；

Sb3：将Sb2制得的溶液在磁场中放置12～18min，待所述羧基磁珠沉降后用磁微粒缓冲液洗1～3遍，随后定容至8～12mg/mL，2～8℃保存。

5.根据权利要求4所述的测定胃泌素17含量的试剂盒，其特征在于：所述磁微粒缓冲液通过将12.12～15.26mg的Tris、5.82～8.58mg的NaCl和50～60g的甲基纤维醚加入到1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解制备而成。