[发明专利]一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了生物化学相关技术领域的一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法，包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物；其中抗试剂异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体和碱性磷酸酶标记的胃泌素17标记抗体；磁微粒试剂为磁微粒与羊抗FITC连接物；本发明将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系，并且采用了一步法反应模式，使得检测灵敏度、精密性大大提高、检测范围扩大，反应时间大大缩短，从开始加样到检测结果，时间少于35min，明显快于同类试剂盒；并且可以在全自动化学发光仪上同时测定多个样本，实现胃泌素17的高通量快速化测定，准确度高，特异性强，精确度和检测效率有了较大的提高。

技术领域

本发明涉及生物化学相关技术领域，特别涉及一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法。

背景技术

胃泌素17(gastrin17，G17)是一种重要的胃肠道肽类激素，于1905年由英国学者Edkins首先发现并命名。它主要由G细胞分泌。G细胞是典型的开放型细胞，以胃窦部最多，其次是胃底、十二指肠和空肠等处。人胰岛的D细胞亦能分泌胃泌素。

胃泌素17能刺激胃酸分泌，促进细胞增殖和抑制细胞凋亡，也对癌细胞生长及细胞恶性转化产生影响。同时胃泌素能够促进胃肠道内胃蛋白酶、促胰液素、胰液、胆汁的分泌，促进降钙素和胰岛素的释放，也可以加强胃肠道运动和胆囊收缩。近年来血清胃泌素17、胃蛋白酶原I/II、幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，H.Pylori)抗体等胃粘膜“血清学活检”指标凭借其低成本、简便易行、无创、可动态随访等特点，在临床胃肠疾病的辅助诊断中受到广泛重视。

目前已知的胃泌素17测定方法有荧光免疫层析法(FICA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光法等。荧光免疫层析法的有机染料标记物光照下易分解，易发生光漂白现象，具有浓度猝灭特征，会影响分析结果的准确性和可靠性。酶联免疫吸附法存在检测时间长、操作复杂、重复性差、不适于急诊和临床病人及时诊断的需要。

发明内容

针对现有技术存在的检测时间长、操作复杂、重复性差、不适于急诊和临床病人及时诊断的需要的技术问题，本发明提供一种测定胃泌素17含量的试剂盒及其使用方法。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种测定胃泌素17含量的试剂盒，包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物；所述校准品、所述质控品、所述抗试剂、所述磁微粒试剂和所述发光底物分别独立地包装；

所述校准品通过在1L新生牛血清中加入0.01～0.05g的四环素和0.1～0.5g的硫酸新霉素，完全溶解后经过0.22μm滤膜处理制备而成；

所述质控品通过用所述校准品溶解胃泌素17抗原制备而成；

所述抗试剂通过包括如下步骤的操作制备而成：

Sa1：将10～20g的Na₂PO₃H·12H₂O、1～2g的NaPO₃H₂·12H₂O、1～5g的绵羊血清、3～10g的新生牛血清、1～5g的马血清加入1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解，用4M的HCl调节pH至5～6，制得抗试剂缓冲液；

Sa2：用所述抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液，向胃泌素17抗体中加入所述胃泌素17抗体质量1.1～1.5倍的所述异硫氰酸荧光素溶液并充分混合，使用pH为8～9的碳酸盐缓冲液平衡，然后使用凝胶层析分离纯化，制得异硫氰酸荧光素标记的胃泌素17包被抗体：