[发明专利]一种增强抗体-荧光微球偶联物信号的方法以及在肌钙蛋白I检测中的应用

权利要求书

1.一种增强抗体-荧光微球偶联物信号的方法，其特征在于，将抗体与荧光微球偶联得到抗体-荧光微球偶联物，将抗体-荧光微球偶联物再与荧光素偶联，得到增强型抗体-荧光微球偶联物。

2.根据权利要求1所述的一种增强抗体-荧光微球偶联物信号的方法，其特征在于，抗体-荧光微球偶联物与荧光素偶联前，使用惰性蛋白将荧光微球表面空位进行封闭。

3.一种增强抗体-荧光微球偶联物信号的方法在肌钙蛋白I检测中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将抗cTnI单克隆抗体与荧光微球偶联，得到cTnI抗体-荧光微球偶联物；

(2)将cTnI抗体-荧光微球偶联物与荧光素偶联，得到增强型cTnI抗体-荧光微球偶联物。

4.根据权利要求3所述的一种增强抗体-荧光微球偶联物信号的方法在肌钙蛋白I检测中的应用，其特征在于，步骤(2)中，cTnI抗体-荧光微球偶联物与荧光素偶联前，利用惰性蛋白将荧光微球表面空位进行封闭。

5.根据权利要求4所述的一种增强抗体-荧光微球偶联物信号的方法在肌钙蛋白I检测中的应用，其特征在于，所述荧光素为异硫氰酸荧光素，所述惰性蛋白为牛血清白蛋白。

6.根据权利要求4所述的一种增强抗体-荧光微球偶联物信号的方法在肌钙蛋白I检测中的应用，其特征在于，步骤(1)中，cTnI抗体-荧光微球偶联物的制备方法如下：

(11)取出荧光微球放入离心管中离心，沉降、去除上清；

(12)向沉降物中加入偶联缓冲液，混匀，然后加入EDC溶液、sulfo-NHS溶液混匀、孵育；

(13)将步骤(12)的溶液离心，沉降、去除上清，再加入偶联缓冲液混匀；

(14)加入抗cTnI单克隆抗体，混匀，室温下用孵育，得到cTnI抗体-荧光微球偶联物。

7.根据权利要求6所述的一种增强抗体-荧光微球偶联物信号的方法在肌钙蛋白I检测中的应用，其特征在于，步骤(2)中，增强型cTnI抗体-荧光微球偶联物的制备方法如下：

(21)将步骤(14)的cTnI抗体-荧光微球偶联物溶液进行离心、沉降、去除上清，然后加入封闭液混匀，室温下孵育；

(22)孵育完毕后离心，沉降、去除上清，然后加入1％异硫氰酸荧光素混匀，室温孵育；

(23)最后离心、沉降、去除上清，加入保存液混匀。

8.根据权利要求3所述的一种增强抗体-荧光微球偶联物信号的方法在肌钙蛋白I检测中的应用，其特征在于，cTnI检测在荧光层析检测试纸条上进行，荧光层析检测试纸条包括基板和基板上依次衔接的样品垫、标记物垫、层析膜和吸水垫，所述标记物垫为玻纤垫，所述层析膜为硝酸纤维素膜。

9.根据权利要求8所述的一种增强抗体-荧光微球偶联物信号的方法在肌钙蛋白I检测中的应用，其特征在于，所述玻纤垫经过如下处理：

将处理液喷涂于玻纤垫一侧，喷量4ul/cm；将所述增强型cTnI抗体-荧光微球偶联物和兔IgG-荧光微球偶联物的混合液喷涂于玻纤垫另一侧，45℃烘干。

10.根据权利要求9所述的一种增强抗体-荧光微球偶联物信号的方法在肌钙蛋白I检测中的应用，其特征在于，所述硝酸纤维素膜经过如下处理：

将另一种抗cTnI抗体，使用稀释液稀释至1mg/mL，划线于硝酸纤维素膜上一侧作为检测线；将羊抗兔IgG使用稀释液稀释至0.5mg/mL，划线于硝酸纤维素膜上作为质控线；划膜量1ul/cm，45℃烘干。