[发明专利]利用甲醇和木糖共底物产脂肪酶的基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一株利用甲醇和木糖共底物产脂肪酶的基因工程菌，其特征在于，向宿主菌中导入甲醇氧化酶基因aox1、二羟基丙酮合酶基因das、过氧化氢酶基因cta和二羟基丙酮激酶基因dak；所述宿主菌为南极假丝酵母(Candida antarctica)ZJB09193。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，构建方法如下：

(1)构建TEF-aox1-CYC1t、TEF-das-tCYC1、PDC1p-cta-TDH2t、pGPD-dak-TXPR2表达框，通过多片段克隆的方法，将TEF-das-tCYC1、pGPD-dak-TXPR2两个基因片段与113质粒连接，将TEF-aox1-CYC1t、PDC1p-cta-TDH2t两个基因片段与Pki质粒连接，转化至E.coli DH5α中；

(2)将测序正确的质粒通过酶切得到基因重组片段，将基因重组片段电转化至宿主菌，再通过G418抗性筛选得到所述基因工程菌。

3.权利要求1～2任一项所述基因工程菌在发酵产脂肪酶中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

(1a)试管种子培养：将基因工程菌接种至试管的种子培养基中培养；

(2a)摇瓶种子培养：将试管种子培养液接种至摇瓶的种子培养基中培养；

(3a)发酵产脂肪酶：将摇瓶种子培养液接种到发酵培养基中发酵培养，获取脂肪酶。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试管种子培养和摇瓶种子培养的培养温度为24℃；培养时间18-22h。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述种子培养基配方如下：蛋白胨6g/L，水解酪蛋白4g/L，酵母粉3g/L，牛肉膏1.5g/L，葡萄糖1g/L，其余为水。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述发酵培养基配方如下：大豆粉40g/L，豆油5ml/L，磷酸氢二钾4g/L，硫酸镁1g/L，吐温80ml/L，酵母粉5g/L，木糖15g/L，甲醇0～15g/L，其余为水。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，甲醇浓度为7g/L。

9.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，将摇瓶种子培养液按照10％的接种量接种到发酵培养基中发酵培养。