[发明专利]通过等温扩增技术检测样品中核酸的方法及其试剂盒

权利要求书

1.通过等温扩增技术检测样品中核酸的方法，其特征在于，在所述方法种采用含逆转录酶和DNA聚合酶的等温扩增体系检测DNA为遗传物质的样品，所述方法包括以下步骤：

步骤1：同时提取所述样品中DNA和RNA；

步骤2：在核酸扩增液中等温扩增提取的DNA和RNA，所述核酸扩增液包括逆转录酶和用于等温扩增的DNA聚合酶，所述逆转录酶将提取的RNA逆转录反应生成cDNA和所述DNA聚合酶等温扩增反应提取的DNA和逆转录的cDNA；和

步骤3：对核酸扩增产物进行检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中在同一个温度下完成逆转录和核酸等温扩增反应。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤2中先在一温度下完成逆转录反应，然后在另一温度下完成核酸扩增反应。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述逆转录反应和/或等温扩增反应温度是37℃-65℃，优选为50℃-65℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA聚合酶为具有链置换功能的DNA聚合酶，包括Bst DNA聚合酶或Phi29 DNA聚合酶。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述等温扩增为环介导等温扩增、重组酶聚合酶等温扩增、单引物等温扩增、依赖解旋酶的等温扩增、链替代扩增、交叉引物扩增技术、核酸依赖性扩增检测技术或切刻内切酶核酸等温扩增。

7.在权利要求1-6任一方法中使用的等温扩增试剂盒，所述试剂盒包括：同时提取样品中DNA和RNA的提取试剂，和包括逆转录酶、用于等温扩增的DNA聚合酶、RNaseH以及引物的核酸扩增试剂。

8.根据权利要求1-6任一方法中使用的等温扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：同时提取样品中DNA和RNA的提取试剂，和包括逆转录酶、用于等温扩增的DNA聚合酶、RNaseH、扩增引物F3、R3、FIP、BIP、LF、LB和含RNA碱基的扩增探针、dNTPs、甜菜碱。

9.根据权利要求8所述的等温扩增试剂盒，其特征在于，所述含RNA碱基的扩增探针包含至少1个RNA碱基，且RNA碱基左侧靠近所述探针5’端一侧的探针碱基上标记荧光基团，在所述RNA碱基靠近所述探针3’端一侧的探针碱基上标记淬灭基。

10.根据权利要求9所述的等温扩增试剂盒，所述试剂盒是乙型肝炎病毒核酸检测试剂盒，所述试剂盒包括以下引物和探针，

，

其中HBV-F3、HBV-B3、HBV-FI、HBV-BIP、HBV-LF和HBV-LB为扩增引物，HBV RNA-P为检测探针，其中探针HBV RNA-P的T修饰报告荧光基团，A为RNA碱基，3'末端修饰淬灭基团；和，ATTB-OF3、ATTB-OR3、ATTB-FIP、ATTB-BIP、ATTB-LF和ATTB-LB为内参基因ATTB扩增引物，探针ATTB-ZrnaP为内参基因检测探针，T修饰报告荧光基团，A为RNA碱基，3'末端修饰淬灭基团。