[发明专利]一种人自体脂肪血管基质成分SVF的提取试剂及提取方法

说明书

本发明提供一种人自体脂肪血管基质成分SVF的提取试剂及提取方法，所述提取方法为采集脂肪组织，清洗离心后加入等体积的SVF提取试剂振荡消化，离心获得沉淀物，沉淀物清洗离心过滤获得SVF细胞；本发明的海藻糖溶液对细胞膜蛋白有保护作用，胶原酶溶液和明胶溶液可促进细胞增殖迁移，可提高溶液粘稠度，降低溶液剪切力；达到保护细胞，提高脂肪组织中细胞存活率的目的。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种人自体脂肪血管基质成分SVF的提取试剂及提取方法。

背景技术

脂肪血管基质组分(stromal vascular fraction，SVF)是脂肪组织经消化、离心去除成熟的脂肪组织、结缔组织，得到一种含间充质干细胞(6.7％)、内皮前体细胞(2％)和单核细胞/巨噬细胞(10％)等多种细胞的混合物。脂肪组织及骨髓中均可提取出SVF细胞，但在脂肪组织中，1％～10％的有核细胞被认为是干细胞，而骨髓中只有0.0001～0.01％的有核细胞是干细胞。可以从一克脂肪组织中获得的干细胞数量约为5000-200000个细胞。

SVF细胞中的干细胞可分泌多种细胞因子、趋化因子、生长因子和外泌体。这些物质对周围组织器官有积极的影响，如缓解炎症、改善微循环等。植入组织内的干细胞，也可分化成组织特异性细胞。如SVF在关节炎治疗方面有较好的治疗效果。2011，PAK采用自体SVF和富血小板血浆和透明质酸成功地治疗了2例人类膝关节骨关节炎患者。此后临床治疗关节炎越来越广泛，据临床研究资料显示，已有研究人员对1114例关节炎患者予以临床治疗。2013年，Pak等人治疗了91位患者，其中65％的人群表述治疗3个月后有效果；Bui等人对2级和3级21位关节炎患者予以SVF治疗，VAS评价及Lysholm评价均显示患者在8.5个月关节功能得到改善。

目前关节炎治疗主要有药物治疗如非甾体类抗炎药(NSAIDs)、类固醇和透明质酸(RAS)；物理疗法如针灸、职业训练等；手术治疗如关节腔穿刺、关节置换、关节矫形等；免疫及生物治疗如干细胞移植、血浆置换等。药物治疗、物理疗法，都旨在纠正症状，而不是治疗潜在的原因。当药物治疗和物理疗法治疗失败时，患者通常进行全膝关节置换(TKR)或全髋关节置换术(THR)手术。TKR和THR手术均具有较高的发病率和死亡率。全膝关节置换术后的第30天死亡率为0.18％，5.6％的患者出现并发症。全髋关节置换术后30天和90天的死亡率分别为0.24％和0.55％。：SVF采用患者自身脂肪组织，回输到体内不会出现任何副作用，且细胞治疗不需对关节进行破坏性处理，通过SVF自发迁移至受损部位而生成软骨组织。细胞回输后仅需静养几天即可进行正常的生活、工作。SVF还可对关节炎症、肌腱缺失、髌骨软骨软化、半月板缺失等关节部位均有一定的治疗效果。

目前SVF细胞提取一般将脂肪组织清洗离心后加入等体积的胶原酶以150-280rpm，37℃振荡消化30-60min，离心获得沉淀物，沉淀物清洗离心过滤获得SVF细胞。但这种组织消化方式中的酶消化作用过长及振荡产生的剪切力均对细胞活率有较大影响。

发明内容

鉴以此，本发明提出一种人自体脂肪血管基质成分SVF的提取试剂及提取方法。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种人自体脂肪血管基质成分SVF的提取试剂，所述提取试剂包括以下原料：胶原酶、海藻糖及明胶。

进一步的，所述提取试剂包括以下原料：0.1-1w/w％胶原酶溶液、2-10w/w％的海藻糖溶液及0.05-0.15w/w％的明胶溶液。

进一步的，所述胶原酶溶液、海藻糖溶液、明胶溶液的体积比为0.8-1.2：0.8-1.2：0.8-1.2。

进一步的，所述胶原酶溶液、海藻糖溶液、明胶溶液为DMEM培养基。

进一步的，人自体脂肪血管基质成分的提取方法，包括以下步骤：