[发明专利]一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒，其特征在于，包括SARS-CoV-2核衣壳蛋白抗原胶体金。

2.如权利要求1所述的一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将SARS-CoV-2核衣壳蛋白进行表达和纯化；

(2)制备SARS-CoV-2核衣壳蛋白抗原胶体金。

3.根据权利要求2所述的一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，SARS-CoV-2核衣壳蛋白的表达，包括如下步骤：

(11)以SARS-CoV-2核衣壳蛋白的氨基酸序列所对应的核苷酸序列为模板，设计核苷酸序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的正向引物、核苷酸序列如SEQ ID NO:4或SEQ IDNO:5所示的反向引物；

(12)经过PCR扩增、双酶切PCR产物及载体，将SARS-CoV-2核衣壳蛋白对应的核苷酸序列克隆至质粒载体中；

(13)利用步骤(12)所得载体转化大肠杆菌，再进行诱导培养；

(14)对培养后的大肠杆菌进行离心，获取SARS-CoV-2核衣壳重组蛋白。

4.根据权利要求3所述的一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒的制备方法，步骤(12)中，所述质粒载体为pET28a、pET22b、pET21b、pET32a、pET40、pGex-6P-1和pMal-c2x中的任意一种。

5.根据权利要求3所述的一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤(13)中，大肠杆菌采用E.coli BL21或者Rossetta菌株，诱导培养方法为：将转化后的大肠杆菌涂布于含有氨苄青霉素或卡那霉素的平板中，于37℃孵育，然后挑取单菌落接种于液体培养基中培养2-5h，最后加入IPTG进行诱导，培养3-18h。

6.根据权利要求3所述的一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤(14)中，SARS-CoV-2核衣壳重组蛋白的获取方法为：收集离心后的大肠杆菌菌体，加入缓冲液破碎菌体后离心获取上清液，经过层析进行纯化，获得SARS-CoV-2核衣壳重组蛋白。

7.根据权利要求3所述的一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒的制备方法，其特征在于，SARS-CoV-2核衣壳蛋白纯化后，利用抗N蛋白的抗体进行验证。

8.根据权利要求2所述的一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，制备SARS-CoV-2核衣壳蛋白抗原胶体金的具体步骤如下：

(21)以氯金酸溶液、柠檬酸三钠水溶液为原料配制胶体金溶液；

(22)将SARS-CoV-2核衣壳重组蛋白溶液转入透析袋中，透析过夜；

(23)将透析处理之后的SARS-CoV-2核衣壳重组蛋白加入等体积的胶体金溶液中，静置，然后加入BSA溶液，充分混匀后离心，弃上清液，胶体金沉淀用保护液再溶解，即制得SARS-CoV-2核衣壳蛋白抗原胶体金。

9.根据权利要求8所述的一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤(22)中，透析方法为：将SARS-CoV-2核衣壳蛋白溶液浓度稀释至1mg/mL后转入透析袋中，2-8℃下用浓度为20mmol/L、pH值为7.0的Tris缓冲液透析过夜。