[发明专利]一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒及其制备方法在审
申请号: | 202010126261.3 | 申请日: | 2020-02-27 |
公开(公告)号: | CN111337668A | 公开(公告)日: | 2020-06-26 |
发明(设计)人: | 杨正林;石毅;蒋黎;钟凌;串俊兰;龚波;徐雨;干盈盈;龙腾镶 | 申请(专利权)人: | 四川省人民医院 |
主分类号: | G01N33/569 | 分类号: | G01N33/569;G01N33/543 |
代理公司: | 成都行之专利代理事务所(普通合伙) 51220 | 代理人: | 梁田 |
地址: | 610000 四*** | 国省代码: | 四川;51 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 新型 冠状病毒 抗原 胶体 快速 诊断 试剂盒 及其 制备 方法 | ||
本发明公开了一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒及其制备方法,包括SARS‑CoV‑2核衣壳蛋白抗原胶体金。该试剂盒操作简单,能够快速诊断出患者是否感染SARS‑CoV‑2,利于疫情的有效控制。本发明还公开一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒的制备方法。
技术领域
本发明涉及疾病检测领域,具体涉及一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒及其 制备方法。
背景技术
人感染了冠状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严 重病例中,感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭,甚至死亡。目前对于新型冠状 病毒所致疾病没有特异治疗方法。因此对于疾病的预防和早期诊断对于控制新型冠状病毒疫 情蔓延尤为重要。
发明内容
为了提高新型冠状病毒的早期诊断效率,本发明公开一种新型冠状病毒抗原胶体金快速 诊断试剂盒,该试剂盒操作简单,能够快速诊断出患者是否感染SARS-CoV-2,利于疫情的有 效控制。
本发明还公开一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒的制备方法。
本发明通过下述技术方案实现:
一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒,包括SARS-CoV-2核衣壳蛋白抗原胶体金。
一种新型冠状病毒抗原胶体金快速诊断试剂盒的制备方法,包括以下步骤:
(1)将SARS-CoV-2核衣壳蛋白进行表达和纯化;
(2)制备SARS-CoV-2核衣壳蛋白抗原胶体金。
SARS-CoV-2核衣壳蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
其中,步骤(1)中,SARS-CoV-2核衣壳蛋白的表达,包括如下步骤:
(11)以SARS-CoV-2核衣壳蛋白的氨基酸序列所对应的核苷酸序列为模板,设计核苷酸 序列如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的正向引物、核苷酸序列如SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5 所示的反向引物;
(12)经过PCR扩增、双酶切PCR产物及载体,将SARS-CoV-2核衣壳蛋白对应的核苷酸 序列克隆至质粒载体中;
(13)利用步骤(12)所得载体转化大肠杆菌,再进行诱导培养;
(14)对培养后的大肠杆菌进行离心,获取SARS-CoV-2核衣壳重组蛋白。
进一步的,步骤(12)中,所述质粒载体为pET28a、pET22b、pET21b、pET32a、pET40、pGex-6P-1和pMal-c2x中的任意一种。
进一步的,步骤(13)中,大肠杆菌采用E.coli BL21或者Rossetta菌株,诱导培养方法 为:将转化后的大肠杆菌涂布于含有氨苄青霉素或卡那霉素的平板中,于37℃孵育,然后挑 取单菌落接种于液体培养基中培养2-5h,最后加入IPTG进行诱导,培养3-18h。
进一步的,步骤(14)中,SARS-CoV-2核衣壳重组蛋白的获取方法为:收集离心后的大 肠杆菌菌体,加入缓冲液破碎菌体后离心获取上清液,经过层析进行纯化,获得SARS-CoV-2 核衣壳重组蛋白。
步骤(1)中,SARS-CoV-2核衣壳蛋白纯化后,利用抗N蛋白的抗体进行验证。
进一步的,步骤(2)中,制备SARS-CoV-2核衣壳蛋白抗原胶体金的具体步骤如下:
(21)以氯金酸溶液、柠檬酸三钠水溶液为原料配制胶体金溶液;
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