[发明专利]一种中国被毛孢原生质体的制备及再生方法有效
| 申请号： | 202010126500.5 | 申请日： | 2020-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN111334436B | 公开（公告）日： | 2021-12-24 |
| 发明（设计）人： | 金利群;柳志强;徐哲文;张博;郑裕国 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;C12N1/00;C12R1/645 |
| 代理公司： | 浙江千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 冷红梅 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 中国 被毛孢 原生 质体 制备 再生 方法 | ||
1.一种中国被毛孢原生质体的制备及再生方法，所述方法包括：
（1）菌丝的培养与纯化：取中国被毛孢菌丝体，接种于种子培养基中，于11~26 ℃、60~200 rpm转速下培养15~30天，再转接于发酵培养基中，于11~26℃、60~200 rpm转速下培养3~12天，在离心机6000~10000 rpm下用0.4~1.0 mol/L 氯化钾溶液洗涤菌丝2~3次，收集得到纯化后的菌丝体；
（2）原生质体的制备：向步骤（1）所得中国被毛孢菌丝体中加入复合酶液，于16~30 ℃、80~150 rpm下酶解0.5~3 h，过滤菌丝收集原生质体，在离心机3000~5000 rpm下用0.6~1.0mol/L 氯化钾溶液洗涤原生质体2~3次，将原生质体重悬于0.6~1.0 mol/L 氯化钾溶液中；所述复合酶液为以0.6 mol/L 氯化钾溶液作为渗透压缓冲液，配制的Driselase from
（3）原生质体的再生：将步骤（2）得到的原生质体涂布于再生培养基中，添加湿棉球于13~30℃下培养15~30天，得到再生中国被毛孢；所述再生培养基组成如下：蚕蛹粉15 g/L，麸皮15 g/L，玉米粉10 g/L，葡萄糖15 g/L，酵母粉5g/L，蛋白胨10 g/L，糊精5 g/L，琼脂15g/L，甘露醇0.6mol/L，磷酸二氢钾0.2 g/L，无水硫酸镁0.1 g/L，溶剂为水。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中种子培养基组成如下：蚕蛹粉10~30 g/L，麸皮10~25 g/L，玉米粉10~25 g/L，葡萄糖10~30 g/L，酵母粉3~10 g/L，糊精3~10g/L，蛋白胨5~20 g/L，磷酸二氢钾0.05~2 g/L，无水硫酸镁0.05~2 g/L，溶剂为水。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中发酵培养基组成如下：葡萄糖10~30 g/L，酵母粉3~10 g/L，糊精3~10 g/L，蛋白胨5~20 g/L，磷酸二氢钾0.05~2 g/L，无水硫酸镁0.05~2 g/L，溶剂为水。
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