[发明专利]一种用于检测睾酮素的ELISA试剂盒的制备方法

说明书

本发明公开了一种用于检测睾酮素的ELISA试剂盒的制备方法，属于免疫分析快速检测技术领域。该试剂盒包括孔板、框架、吸水纸、滴管、试剂、说明书，睾酮单克隆抗体、辣根过氧化酶标记羊抗鼠抗体、睾酮标准溶液、底物液、显色液、终止液、浓缩洗涤液。本发明采用间接竞争ELISA检测方法，采用鸡卵清蛋白偶联肟化后的睾酮和高特异性睾酮单克隆抗体检测特异性强，检测范围宽，假阳性率低，可实现快速定量检测，且灵敏度高、误差小，为及时检测提供了极大的便利，能够真正地解决市场需要，适用于食品工业、环境保护和生物化学等领域。

技术领域

本发明涉及一种用于检测睾酮素的ELISA试剂盒的制备方法，属于免疫分析快速检测技术领域。

背景技术

类固醇激素(Steroid hormone)是生物体内产生的一类调节机体代谢功能的微量物质，又称化学信息素。此类物质有较强的蛋白质同化作用，可以提高蛋白质沉积，降低脂肪含量，从而提高饲料转化效率。睾酮(Testosterone，T)是哺乳动物体内常见的具有雄激素作用的类固醇激素。

睾酮可以增加肌肉含量，提高骨骼强度，并在雄性生殖器官的发育中发挥重要作用，因而在临床医学中得到应用。由于睾酮具有促进动物体内营养物质沉积和改善生产的作用，因此在畜牧业上被用作动物饲料添加剂，用以促进动物生长，提高产量，养殖场使用睾酮激素后，可以提高经济效益。外源性睾酮也被运动员非法使用，以提高比赛成绩。然而，长期摄入睾酮类激素会导致消费者内分泌紊乱、性早熟，大大增加致癌、致畸的风险。因此，自1986年以来，欧盟委员会就禁止在肉食性动物养殖中以促进生长为目的使用自然或人工合成的激素，以保护消费者可能因食用激素的残留物或其代谢物而引起的发育问题、神经问题、遗传毒性和癌症问题。

睾酮传统的理化检测方法包括液相色谱-质谱(LC-MS)和气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)等方法。这些方法灵敏度高、特异性强，但样品前处理繁琐，不适合大批量的市场监测要求。而免疫学检测方法建立在抗体对抗原的分子识别上，其主要优点是亲合力高、快速、简单、经济实用，能够实现对生物液体的小体积、大批量检测，逐渐成为世界各国有毒有害残留物快速检测的方法之一。

现有王武康等发明的一种检测去甲睾酮(诺龙)的直接竞争酶联免疫测定试剂盒，其提供去甲睾酮抗原合成方案，并用免疫原免疫新西兰大白兔获得去甲睾酮多抗，通过直接竞争酶联免疫测定。其缺点是多抗不具有特异性且不能检测睾酮。

现有何翠红等发明的一种检测人血清中总睾酮的方法，其通过对样品加入内标液，后进行蛋白沉淀并萃取待测物，离心后干燥，再加入复溶剂，对待测样品用高通量的液相色谱串联四级杆质谱仪进行检测。其缺点是样品处理复杂，成本高，耗时长，对实验者操作仪器的要求较高，不能满足目前食品安全检测的快速筛查要求。

现有何庆华等发明的一种用于睾酮残留检测的试剂盒及其制备方法和检测方法，其将肟化的睾酮与牛血清蛋白偶联，包被在微孔上，进行酶联免疫检测。其缺点是BSA本身会产生抗体，特异性抗体会呈假阳性反应。

因此现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

技术问题：

针对现有技术存在的上述不足，本发明提供了一种检测睾酮素的ELISA试剂盒的制备方法。本发明采用间接竞争酶联免疫法，通过读取酶标仪检测出的OD值，对样品中睾酮进行定性分析，并快速定量检测动物源性食品中的睾酮。

技术方案：

本发明第一个目的是提供一种检测睾酮素的ELISA试剂盒，所述试剂盒包括孔板、框架、吸水纸、滴管、试剂，其中，所述孔板中包被睾酮半抗原与鸡卵清蛋白偶联得到的完全抗原，所述试剂包括睾酮单克隆抗体、辣根过氧化酶标记羊抗鼠抗体、睾酮标准溶液、底物液、显色液、终止液、浓缩洗涤液。