[发明专利]一种鲟鱼抗炎肽的制备方法

权利要求书

1.一种鲟鱼抗炎活性肽，其特征在于，包括具有抗炎潜能的三种多肽，其氨基酸序列为：

Lys – Ile – Trp – His – His – Thr – Phe；

Val – His – Tyr – Ala – Gly – Thr – Val – Asp – Tyr；

His – Leu – Asp – Asp – Ala – Leu – Arg – Gly – Gln – Glu。

2.如权利要求1所述的一种鲟鱼抗炎活性肽的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

（1）将鲟鱼去皮去骨，洗净沥干，取肌肉部位绞成肉糜，并通过凯氏定氮法测定鲟鱼肉糜中粗蛋白含量；

（2）取步骤（1）中鲟鱼肉糜加蒸馏水均质，得到混合液，并调整混合液的底物蛋白浓度，再加入胃蛋白酶，加酶量为4000 U/g - 6000 U/g，进行单酶酶解，胃蛋白酶的酶解条件为37 ℃，pH 2.0；经振荡后，得到酶解液，酶解液置于沸水浴中反应20~30 min，然后冷却至室温；再离心，收集上清液、抽滤，得到鲟鱼酶解产物；

（3）采用超滤膜对步骤（2）中得到的鲟鱼酶解产物进行分级分离，获得组分，冻干，得到冻干后的组分；

（4）对步骤（3）中冻干后的组分进行纯化，蒸馏水洗脱，紫外检测波长为280 nm，收集洗脱液，将同一分离峰合并，冻干，得到冻干后的组分；

（5）对步骤（4）中冻干后的组分进一步纯化，纯化后，利用洗脱液线性梯度洗脱，280 nm下检测吸光值，收集组分，透析脱盐，冻干，得到鲟鱼抗炎活性肽。

3. 根据权利要求2所述的一种鲟鱼抗炎活性肽的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述底物蛋白浓度为10 % - 20 %。

4. 根据权利要求2所述的一种鲟鱼抗炎活性肽的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，所述振荡的条件为：120 rpm，6 h；所述离心的条件为：4 ℃温度条件下以10000 rpm 离心15 min。

5. 根据权利要求2所述的一种鲟鱼抗炎活性肽的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述超滤膜的分子量为10 kDa和3 kDa。

6. 根据权利要求2所述的一种鲟鱼抗炎活性肽的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述纯化是使用Sephadex G-15凝胶柱，柱规格1.2 cm × 70 cm，流速为0.8 - 1.2 mL/min，上样体积为2 - 5 mL，样品浓度为10 - 20 mg/mL。

7. 根据权利要求2所述的一种鲟鱼抗炎活性肽的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，所述纯化是使用SP-650M离子交换柱，柱规格1.2 cm × 50 cm，流速为0.8 - 1.5 mL/min。

8. 根据权利要求2所述的一种鲟鱼抗炎活性肽的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，所述洗脱液包括洗脱液A和洗脱液B；洗脱液A为20 - 25 mM的醋酸钠缓冲液，pH为4.5 -5.0；洗脱液B为洗脱液A中再加入0.5 - 1.0 M NaCl。