[发明专利]一种鲟鱼抗炎肽的制备方法

说明书

本发明属于水产品高值化利用领域，涉及一种鲟鱼抗炎肽的制备方法；该方法通过酶法水解鲟鱼肌肉得到酶解产物，以NO释放量为分离评价指标，采用膜分离、Sephadex G‑15凝胶柱及SP‑650M离子交换柱对鲟鱼蛋白酶解产物分离纯化，得到鲟鱼抗炎肽，包含三种具有抗炎潜能的多肽序列：Lys–Ile–Trp–His–His–Thr–Phe；Val–His–Tyr–Ala–Gly–Thr–Val–Asp–Tyr；His–Leu–Asp–Asp–Ala–Leu–Arg–Gly–Gln–Glu；其能有效抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞中NO释放量，且该抗炎肽无细胞毒害作用，有助于实现鲟鱼高值化利用。

技术领域

本发明属于水产品高值化利用领域，具体涉及一种鲟鱼抗炎肽的制备方法。

背景技术

鲟鱼(Acipenser)，隶属硬骨鱼纲、鲟形目，是一类具有生物和经济重要性的鱼类。2016年鲟鱼全国产量为89773吨，占世界鲟鱼总产量80％以上；2017年，鲟鱼被列入国家现代农业产业技术体系(特色淡水鱼体系)中。在鲟鱼产业蓬勃发展的大背景下，其利用主要是以速冻调理产品、开袋即食产品等形式出现。尽管鲟鱼卵制成的“鱼子酱”在一定程度上提高了其经济价值，但仍有90％的鲟鱼副产物没有得到充分利用，总的来说，鲟鱼综合利用率及附加值较低。鲟鱼肉具有最佳的膳食蛋白质和必需氨基酸，是生物活性肽的良好来源，并且，鲟鱼肉还具有免疫功能。

炎症是机体对各种炎症因子的防御反应，是许多疾病中最常见的病理过程。当机体的免疫平衡状态被打破，炎性细胞聚集，启动细胞趋化机制，释放大量炎症细胞因子，如：NO、IL-1β、IL-6等。迄今为止，不受控制的炎症与心血管疾病、糖尿病、癌症等疾病密切相关。近年来，抑制炎症介质的合成或活性已成为治疗炎症的主流，而市售的抗炎药物常常伴有副作用，如降低组织修复能力和损伤胃肠粘膜。因而，寻找一种天然抗炎产物是一个有前景的策略。

食源性抗炎肽由于其安全性高、易吸收及来源广泛等优点而成为研究热点。目前，制备抗炎肽的方法主要有微生物发酵法、合成法及酶解法等。

微生物发酵法利用微生物自身的胞外蛋白酶降解食源性蛋白质获得生物活性肽；李红胜等利用芽孢杆菌发酵制备的大豆肽可显著提高小鼠免疫器官指数，增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性；张奕等利用乳酸菌和酵母菌对新鲜驼乳进行混合发酵，从发酵驼乳中提取分离得到了能促进小鼠脾淋巴细胞增殖的生物活性肽组分。但是由于发酵工艺生产周期较长，容易杂菌污染，有很多产酶菌对机体有毒害作用，得到的产品质量不太稳定。

化学有机合成法是基于活性肽氨基酸序列已知的前提下，从C端开始添加目标氨基酸。Navab等发现口服化学合成肽(Lys-Arg-Glu-Ser)可以降低LDL过氧化物，减轻炎症，减少apoE-null小鼠的动脉粥样硬化；该法一直被用于批量合成靶肽，成本较高且主要是针对已知肽序进行制备。

酶解法因条件温和、安全性高、可控性高、成本低等特点已成为最常用制备生物活性肽的方法。Chalamaiah等用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶对rohu蛋白酶解，三种酶解产物在免疫应答方面存在差异；胡旭阳等采用Box-Behnken实验确定日本黄姑鱼鱼肉免疫活性肽的酶解最佳提取工艺。梁秋芳等通过超声预处理，利用碱性蛋白酶酶解玉米醇溶蛋白，并对其酶解产物进行模拟胃肠消化追踪其抗炎活性最终鉴定出三种抗炎序列。如何对蛋白肽键进行靶向性酶解仍是蛋白质酶解制备活性肽最难解决的核心技术，这涉及到蛋白质的来源、所用酶的种类及应用的水解条件等。